恭喜中国农业科学院兰州兽医研究所孙世琪获国家专利权
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龙图腾网恭喜中国农业科学院兰州兽医研究所申请的专利一种塞内卡病毒A空衣壳及其制备方法和用途获国家发明授权专利权,本发明授权专利权由国家知识产权局授予,授权公告号为:CN115043914B 。
龙图腾网通过国家知识产权局官网在2025-06-13发布的发明授权授权公告中获悉:该发明授权的专利申请号/专利号为:202210613204.7,技术领域涉及:C07K14/085;该发明授权一种塞内卡病毒A空衣壳及其制备方法和用途是由孙世琪;郭慧琛;李梅;穆素雨;张韵;吴金恩;白满元;董虎;尹双辉;丁耀忠设计研发完成,并于2022-05-31向国家知识产权局提交的专利申请。
本一种塞内卡病毒A空衣壳及其制备方法和用途在说明书摘要公布了:本发明公开了一种塞内卡病毒A空衣壳及其制备方法和用途。本发明在细胞感染8h时加入10mM盐酸胍使SVA完整病毒粒子全部形成空衣壳,然后使用10%‑50%氯化铯,230000g,离心2.5h条件下分离SVA完整病毒粒子及空衣壳。为确定分离塞内卡病毒A完整病毒粒子和空衣壳的免疫效果,按2μg鼠的剂量肌肉注射免疫BALBc小鼠,之后检测特异性抗体和中和抗体变化。结果显示SVA完整病毒粒子及空衣壳免疫后诱导产生的中和抗体及特异性抗体相当。本发明的提出为塞内卡病毒A空衣壳的制备提供了新的技术手段,也为更为安全、有效的塞内卡病毒A疫苗的研究提供了技术支持,同时也为其他小RNA病毒的分离纯化奠定了基础。
本发明授权一种塞内卡病毒A空衣壳及其制备方法和用途在权利要求书中公布了:1.一种塞内卡病毒ASenecavirusA,SVA空衣壳的制备方法,其特征在于,包括以下步骤: 1塞内卡病毒A空衣壳的制备 1将细胞悬液加入细胞培养瓶中,在37℃、5%CO2细胞培养箱中培养,待细胞长至80-90%时,换成2%胎牛血清培养基,按体积比1:100接入塞内卡病毒A病毒液,继续放置在培养箱中培养,在SVA感染细胞达8h时加入10mM盐酸胍,继续培养,当细胞感染达到90%时,收毒,得到含有SVA空衣壳的细胞液,-80℃冰箱待用; 2灭活、浓缩 细胞液反复冻融三次,加入灭活剂,150rpmmin摇床摇晃28h,加入阻断剂,并检验是否灭活完全;灭活后的细胞液6000rpmmin离心30min,取上清液进行浓缩,浓缩液再10000rpmmin离心30min,取上清液超速离心机40000rpmmin离心2h,沉淀用1%Trition-100PBS研磨分散,4℃过夜后,10000rpmmin离心30min,收集上清液,加入等体积的三氯乙烯去脂,8000rpmmin离心30min,收集上清液; 2SVA完整病毒粒子及空衣壳分离 利用梯度制备仪制成10%-50%ww氯化铯密度梯度,加入步骤2得到的上清液230000g离心2.5h,获得纯化的塞内卡病毒A空衣壳。
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