申请/专利权人：安徽科技学院

申请日：2017-05-19

公开（公告）日：2020-11-17

公开（公告）号：CN107164472B

主分类号：C12Q1/689(20180101)

分类号：C12Q1/689(20180101);C12Q1/10(20060101);C12N15/11(20060101);C12R1/42(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2020.11.17#授权;2017.10.17#实质审查的生效;2017.09.15#公开

摘要：本发明提供一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒。本发明特异性引物对是根据5个德尔卑沙门氏菌特异性检测靶点设计而成，检测靶点稳定高、特异性强，本发明提供的检测方法包括：提取样品DNA，PCR扩增；凝胶电泳检测扩增产物；比较电泳后条带。通过实验比较分析，本发明方法具有单一性强，检测结果可靠，结果判定简单的特点，可以广泛应用于食品卫生领域。

主权项：1.一种检测德尔卑沙门氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取样品DNA，采用特异性引物对SD1、SD2、SD3、SD11、SD12，分别进行PCR扩增，所述样品来自食品，其中SD1-f：核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，SD1-r：核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；SD2-f：核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，SD2-r：核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；SD3-f：核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，SD3-r：核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；SD11-f：核苷酸序列如SEQIDNO.12所示，SD11-r：核苷酸序列如SEQIDNO.13所示；SD12-f：核苷酸序列如SEQIDNO.14所示，SD12-r：核苷酸序列如SEQIDNO.15所示；S2、凝胶电泳检测扩增产物；S3、比较电泳后条带，若在171bp、164bp、512bp、608bp和296bp位置有条带，则样品中含有德尔卑沙门氏菌。

全文数据：一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒技术领域[0001]本发明涉及分子生物学及生物检测技术领域，涉及一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒。背景技术[0002]德尔卑沙门氏菌（SalmonellaDerby是引起人类感染的主要沙门氏菌血清型之一，此血清型菌株的主要宿主为人类。德尔卑沙门氏菌可存活在畜禽体内，一旦畜禽的粪便或携带此病菌的生肉污染了食品及加工场所，在温度适宜的环境下，此菌就会迅速的生长繁殖，当菌数在食品中达到一定数量，被食用后就会造成食物中毒，危害人的身心健康，严重者甚至危及生命。郑华英、周敦金等在2003年《一起德尔卑沙门氏菌污染水源引起的肠道传染病暴发流行的调查》中显示，武汉市一个村庄因为饮用了未经消毒的井水后，陆续出现了上吐下泻、腹痛发热等症状，随后检验人员进行了取样检验分析，发现该次事故是由于德尔卑沙门氏菌感染而引起。谢春平等在2013年《合肥地区五类食品沙门氏菌污染情况调查分析》中发现，合肥地区常见五类食品（生肉、水产品、卤菜、乳制品、发酵豆制品）的沙门氏菌污染调查表明，在以上食品中共检测出沙门氏菌22株，其中德尔卑沙门菌占到45.6%。国家质量监督检验检疫总局的2002年第25和26号令中明确规定沙门氏菌为必检项目。目前，随着分子生物学的不断发展尤其是聚合酶链式反应PCR的发展，通过分子技术检测鉴定沙门氏菌血清型变得更加可靠。[0003]现有技术中，德尔卑沙门氏菌检测主要使用传统的培养方法，整个检测过程步骤较多，时间较长，一般需要4-6个工作日，而且干扰的因素较多，检测结果的判定较复杂，给食品检测带来非常不利的影响。而且用于德尔卑沙门氏菌的PCR检测的靶基因研究较少且主要是由于没有合适的检测靶点。发明内容[0004]针对现有技术不足，本发明提供一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒，解决了现有技术中德尔卑沙门氏菌检测结果判定复杂、检测周期长的技术问题。[0005]为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：[0006]一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因，RU61_00441、RU61_00445、RU61_00447、RU61_RS09205、RU61_RS06985，RU61_00441具有如SEQIDN0.1所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_00445具有如SEQIDN0.2所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_00447具有如SEQIDNO.3所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_RS09205具有如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_RS06985具有如SEQIDNO.5所示的核苷酸序列或其特异性片段。[0007]用于扩增所述靶基因的特异性引物对，所述特异性引物对分别为：SDI、SD2、SD3、SDll和SD12,其中，[0008]SDl-f:核苷酸序列如SEQIDNO.6所示、SDl-r:核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；[0009]SD2-f:核苷酸序列如SEQIDNO.8所示、SD2-r:核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；[0010]SD3-f:核苷酸序列如SEQIDN0.l0所示、SD3-r:核苷酸序列如SEQIDN0.ll所示；[0011]SDll-f:核苷酸序列如SEQIDN0.12所示、SD3-ll:核苷酸序列如SEQIDN0.13所示；[0012]SD12-f:核苷酸序列如SEQIDN0.14所示、SD12-r:核苷酸序列如SEQIDN0.15所不。[0013]—种检测德尔卑沙门氏菌的方法，包括以下步骤：[0014]S1、提取样品DNA，PCR扩增；[0015]S2、凝胶电泳检测扩增产物；[0016]33、比较电泳后条带，若在17讣？、16仙？、512?、608?和296?位置有条带，则样品中含有德尔卑沙门氏菌。[0017]优选的，所述凝胶电泳后171bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；164bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；512bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示;608bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示;296bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。[0018]优选的，所述PCR扩增过程中，25μ1包含有2XMaster12.5μ1，10μΜ引物对Ιμΐ，模板取1-5μ1，补ddH20至25μ1。[0019]优选的，所述PCR扩增过程的反应程序为:94°C预变性10min，94°C变性30s，60°C退火3〇8,72°：延伸458,35个循环，72°：延伸1〇11^11。[0020]优选的，所述凝胶电泳采用琼脂糖凝胶电泳。[0021]优选的，以25ylPCR反应体系计量，对于权利要求2所述的SDl、SD2、SD3、SDl1和SD12引物，需要德尔卑沙门氏菌总DNA浓度彡2.685ngμ1。[0022]一种用于检测德尔卑沙门氏菌的试剂盒，所述试剂盒包括所述的特异性引物对。[0023]一种所述的靶基因或所述的特异性引物对或所述的试剂盒在检测德尔卑沙门氏菌中的应用。[0024]本发明提供一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒，与现有技术相比优点在于：[0025]本发明通过基因组比较分析获得德尔卑沙门氏菌的特异性检测靶基因，从而通过特异性引物对进行PCR扩增、电泳检测该目的基因，本发明检测结果准确，检测过程简单，检测周期短，实现了德尔卑沙门氏菌高特异性快速检测的目的；[0026]本发明提供检测德尔卑沙门氏菌的5个特异性靶基因、相应的PCR引物对、利用以上引物对和靶基因进行检测，特异性引物对是根据5个德尔卑沙门氏菌特异性检测靶点设计而成，该特异性检测靶点稳定高、特异性强，通过合理优化PCR扩增反应体系，凝胶电泳检测手段，可以快速、准确地鉴定出德尔卑沙门氏菌；[0027]采用本发明的检测方法可直接鉴定德尔卑沙门氏菌，不需要血清型实验，检测时间缩短在12h以内，并且，由于检测过程无需采用传统检测方法中必须使用的抗血清，可降低检测成本，本发明通过PCR检测特异性DNA片段，具有单一性强，检测结果可靠，结果判定简单的特点，能够广泛应用于食品卫生领域。附图说明[0028]图1为本发明特异性引物对SDl、SD2、SD3、SDl1和SD12对不同菌种特异性评价凝胶电泳结果图；[0029]图2为本发明特异性引物对SDl、SD2、SD3、SDl1和SD12对不同模板浓度灵敏度评价凝胶电泳结果图。[0030]图中1号引物为SDl特异性引物对;2号引物为SD2特异性引物对;3号引物为SD3特异性引物对;11号引物为SDl1特异性引物对;12号引物为SDl2特异性引物对；[0031]I、CldH2O;2、德尔卑沙门氏菌;3、猪霍乱沙门氏菌;4、乙型副伤寒沙门氏菌;5、丙型副伤寒沙门氏菌;6、汤普逊沙门氏菌;7、亚利桑那沙门氏菌;8、都柏林沙门氏菌;9、鸭沙门氏菌；10、波斯坦沙门氏菌；11、阿伯丁沙门氏菌；12、S.病牛沙门氏菌；13、山夫顿堡沙门氏菌；14、火鸡沙门氏菌；15、甲型副伤寒沙门氏菌；16、伦敦沙门氏菌；17、鼠伤寒沙门氏菌；18、肠炎沙门氏菌；19、布雷德沙门氏菌;20、达喀尔沙门氏菌;21、伊斯特本沙门氏菌;22、迈阿密沙门氏菌；23、阿贡纳沙门氏菌；24、巴森海德沙门氏菌；25、蒙特维的亚沙门氏菌;26、耶路撒冷沙门氏菌;27、波恩沙门氏菌;28、布伦登鲁普沙门氏菌;29、圣保罗沙门氏菌;30、海德尔堡沙门氏菌；31、肯塔基沙门氏菌；32、布洛克利沙门氏菌；33、博纳恩沙门氏菌；34、旺兹沃斯沙门氏菌;35、阿德莱德沙门氏菌。具体实施方式[0032]为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合实施例对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。[0033]实施例1:[0034]PCR检测方法对不同菌种特异性评价[0035]1、德尔卑沙门氏菌血清型特异性基因的筛选[0036]在NCBI数据库中获得了德尔卑沙门氏菌CVM40386菌株（NZ_JYYM01000031的全基因组序列，根据比较基因组的方法将该菌基因组的每个基因利用NCBA网站的Blast程序进行比对，选择与该血清型同源性较高Φ值=0,Qyerycover=0%同时与其它微生物的同源性很低Qyeryc〇ver—种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因.、.特异性引物对及检测方法和试剂.盒15PatentInversion3,3567DNA德尔卑沙门氏菌（SalmonellaDerbyRU61JM441基因序列1ATGACGMGAGCCAAGTCCACCGGCAAGGGTGGATTTCCCTTTTGATIGCGCCGGAACAT60[0070]GAAGAGCGGGCTAAGCAGATACGGGCCAAACGTGACCGCCAGTATGGAAACATCTACACC120GAGGCTGCCACTGATGAGCGATCGGTGGGCGACCTAGGCGAGATGGTTTTCAACTCGTGG180CTTAAGCACGAAGGCATTCAAGGTTTTGAGTGGGTGCTGGACGATGCAGCCGGTCAGCCT240GATTTCGTGACGGCCCTGAACATCCCCATCGCAGTCAAGACGGTGAAGCGCAAGGTGCCG300CCCCGCGAGGACTACACCGCCCAGATCACCGCCCGCCATGCGGGGGAACCCATCGACCAG360TTCTTCTTCATGACCTACGAAATCGCAAAGCGCCGCATGTGGCTGTTGGGGGGTATCAAC420CGCGAATGCTTTCTGCAGGAAGCTCGCTATTACGGTGCTGGTGAATGTGTACATGCCMC480TACAAGATTCGAGAGCtGGCATfiACrATTTATAftClTTGAGATCGCTAAGCTAATTCCGCCA540AAGGTGTGGATTAAGACGGTGGCGTAG5672204DNA德尔卑妙门_氏菌1Sdh加nellaDefbyRU61JM445基因序列2AT6AAGGAGGGCGGCCACTGGCCGCCTTCITACTTCTCATTGGGGACCAGTCTCGOCCCT60:ACTGGTGGTGTATCGTTGCAACCGTCATGTTCGGAAAACGGTGGTTTTCTTGACAGTCTG12GCCGGGCTTCGCGCTTTTGTGGCTGGACGCATCTAGTAGTGTTAAGATACCCGTAAATTTT1:80TCMTGTTTC5GTACTGTCAATGA20431773DNA德尔卑沙门氏菌（SalmonellaDerby[0071]RU61_00447基因序列3ATGCATCATATCTCACAAATTAGAATACA6AATTTCMATCAATCGCGGACGGAACATTT60CCACTTTCGCAATACACCCCCTTGGTTGGCTATAACAACGCTGGAAAAACTAATATTATTIJOCGGGCTATTGGCTGGATAATCMACGATCTAGCCTCGCGCCAGAAGACTTTGACCTTACC180GATCAGCCAATTATTGTAGiAGCGGAAATCTCTCGCATMGTGCTGAAGTGCTCeiTGCG240ATTGGTGATGCTCACCGTGGACGTATCGAGCCCCTTGTCGTTGACGGTCAGATACGTATT300AGGCGCACGrAAGCCACTCCAGGGCAGCCAGTTGCAGGGATACGATTTGAAGTATTAAGG360CGA.GMGCGGGTCAAGATGAATGGGTTGTCAATCCAGCAGGAATCGACGCTGCAATAGGC420：GCTCTeTTTCCCGAGCCTATTTTTATTGGAGCGATGGAAAACGCCACAGAGGACGTAGCG480AAATTT6GTAGCGGAACCACAATCGGCAAGCTTCTTAAAGAGATAATGGCTCCCGTCATT540GATCGGCACTCGCCTGCTGTTGCTGAGGCACTGCAAGACGTCGGAAGGCGTGTTTGAGCC600AACGCTGAGAATAAAGACGAAACATTAGTCGATCTCGACGGCGGAATXCAAGGeGAGCTG660TCCAAGCTATTCCCCGGTGTCTCCGCCAAGACGCACATACCTGTCCCAGATTTTTCTGAT720TTCATGAAATCAGCGACGATACGGATTTTTGAAGAGGGGTTCGAAAATCCCGACGGGAGG780GATGCCTCGTCATTTGGGCATGGCGCCCAACGGTCTATACMATAGCTCTTATTAAGTGT840：CTAGCCGAAGTTCGAAGAGCTGGCGGTGGAAATGCTGGTAGAACGACGCICCTTCTGATTWQGATGAGCCAGAGCTCTATCTACACCCCCAAGCTATCGAAGTCGTACGTGCAGCTTTAAGC960CGACTCGCTGGCGACGGCTATCAGGTGGTCATTACAACGCATTCAGCAAATATGATTTCT1020CGGGACGATGCCCCTAATACCCTTCTCATAAGAAGAAGCGCAGCTTTAGGGACAAGATGC1080TATCCACGAATAAAGGATGCGGTGGCAGCGGCAATTGATGATGCGCAGCATCAGTCAGAA1140GCGCTATTTGCCCTTTCAAACTCGAGTAAGATTCTTTTTTCCGAGCGAGICGTAATAACA1200：GAAGGAAAAACCGAACGCACAATTCTGCCTACAATATTTCACAACTCTTTTGGAACTACT1260CCCGGTGMGATMGATTGGGTTTGTTGATATCGGAGGAACTCCTAATATTCCAGATACT1320ATAAAAGTGTTGCGGTCGATGGGCGTGCCTTGCAAGGCAATTGTAGATTrIAGATTTTGCC1380：TTTAGGATAGCTCCTCTTAAGGGTCT0CTCTCGCCC6ATCATGCTGATCTCATCGCATGC1440[0072]AUGCAATACTGGAAGAAl'TUGAAATGGCGGCCACATTGGCCTTGATGCAGATGGGCTTIoOOCCTACTAGACATAATGGAATGCCCGCTGCGGCGGCCTTCGAMGACTTGCCCMGAAGAA1560AACfCAATArrArTGCATT；CAAGATTGCATΓτΑΑΟΑΊΊ'ΤΓτΑAAGC：GATGGGCATTTGGCTA1620TGGACGAAAGGCGCGATTGAAGCGCACCTTGGTATAGCCAAMCAAGTGCAGCCCACATA1680ACCTTCATGACCAGCCTTTCTAATGAGGAATATAAAGCTGGCCTTCCCGACTACCAATCT1740JI'TAGCAGAGCAATG；A'J'TGGTTGGGCCTTTAA】77341113DNA德尔卑沙门氏菌（SalmonellaDerbyRU61_RS092:05基因序列4ATGAGTTTTGTTAATGAGTTATCTATAGMGACAATGCGGCTCCTCCATCAGCCACAGCC60AAAATTACTGCCCAGAGGATAGGTMTTTATTACGGAATAG6TATCMGATTTTATACAT120AAAAGGGAAGCAGGAAATGGCACTTGGTCCAACTCAGATTTTTTATCTTTCAAAAATGCA180TGCGATAAATTGCAGAGCGAAGAGTATGAAAGATTTGATGAAATITTGAGAGMAAACAG240TCAGATATTTCAATGGCACTATCATCTTTTGATTATMATTTTTATTTGTAATGATGCAT30GACTGGTAAAAAAGGTGCTGCCGAGAACATATTGTCTGACATGAAGCAATGGCAAAGACAA360：GTTMTXmGCATCTTTGATT6GGGA1AATAGCCCCMTfiATGACTTACCATTCCAAGTGmCATCTTGTCTCAGCAGAAGATATTCAGCAATGGTTAGCCGCAGGAACAAGAAGCAGTGTA480GATTTAGATGACGTAGAAATAGxUMATATGGACAAATAGATGAACCACATCAAGCATTT540TATGGTTTAG丁AAGTGGAGACCAAATTGCTGATTGGTGGAAAATATATGGAACCAGATTA600TTTACTAAAAATATAAGAAATTTATTAGGAAAAACAGAAGTTAACGATGCAATTAAAGTA660ACCGCATCACy\AAATCCTGAATTATTTTGGTATTACMTAATGGTATCACTCTCTTGCTT720[0073]AATAGTGTTGAACCACATAGACGTAATGCATCCAGAGGCTTCGAAAGAGGATGCTTCCGT780TTTACTGACGTAAGTGTAATTAATGGTGCTCAAACTGTAAGTAGTTTAGGCATGAl'GGCC8406GGTCTGTGGGGGAMAGTTATCTAATATAAAAATATCAGGTCGCTTCATAAAATTATCA900GGAAATGAAGACATTGCAAATTCTATAACAAAGGCAAATAACIKCAMATAGAGTATTG96ΘGGTAGAGATTTTGCCTCTCAGCGTCCTGAACAACACCGACTTTCGAAAGAAATTGCAATT1020GAAGGATATCAATATCAGTTGCTACGTTCTGGCCCAAATGATACATCTBGCSATGCCTCC1080:ATTATTGATCTCGACGAAGCGCCGGGGCAATAG111351059DNA德尔卑沙门氏菌（SalmonellaDerbyRU61_RS069:85基因序列5ATGAylGGCAC：TGAATTTGTATGGTGTACAGGATGTCAGCTATGAAGACGTGCGGAAACCT60GAAATTGAAAAAGAAAATGATGTTCTGATTAAAGTAMTACAGCGGGTATATGTGGGTCT120GATATATCTCGTTTCGGGAAAATAGGATCATATAATCCCGGTCTGACATGGGGGCATGAG180TTTTCCGGTATCGTGGAGAGCACGGGGAGGGGGGTTACATCGGTCAGCAAAGGCGACCGC240GTTACGGCCTGTAACTGCTTTCCATGCTTCCATTGCGACTACTGTAAACAGGGAAATTAT300GCCCGGTGTACGGATATGAAGGTACTGGGAGGCCAGGTCAACGGTGCTTTTGCTGAATAT360ATTUGMTGCCTUCGGAGAACGTCCTGAAATIACCCOATTCTATGGACTTTGQGACAGCA42QAGCTTTATTGAGCCATCCAGTGTGGTTGTGCATGGCATGCGGCAAGTTGATATCAAGCCG48GGTAGCAGTGTGGCCATTGTCGGGTGCGGGACTATCGGCTTACTTGCCGTTCAATGGGCA540AAAATCTGCGGTGCGGGGGACGTGTTCGCATTTGATACCGACGAAGCTAAACTCGCGGTC600GCGACGAAAACAGGGGCAACGGAAACTTTCTCtCGTCAAAGATGAAAACTATTTATCCCGG660TTCCATGAAATCACCTATGACAAAGGTGTCGATATCGTTTTTGAATCATCTGGTAATGCT720[0074]GCTGGGATTAGCTCATCGCTGCTTCTGGCGGCAAAAGGCGGCGCGGTAGTACTGCTGGGC780ATACCTTATGGGGACGTTGCTTTACCCCGGCTGAATTTTGAAAAAATTGTGCGTAATGAA840CTGAAAGTCATTGGTTGCTGGAAGTCTATGTCT6GACCGTTTCCTGGAAAAGAATGGCAG900ACATCCATCGATTATCTCAGTTCTGGAAAGATTfiATGTSTCCCCATTGATTACCCGGCAG9606TTGGGATGGMGATGTTCCATCACTTTTGCCAGAGCTTTACAACCGAAAATCGTTTTTC1020GTTAAGGTCCTCATCAACGTTCAAGCGTTATCCTGA1059618DNA人工序列德尔卑沙门氏菌特异性引物对SDl-f6€A€CG：AGGCT€CCACTGA18721DNA入工序列德尔卑沙门氏菌特异性引物对SDI-r7TTCACCGTCT观CTCCGATΪ2182:3DNA[0075]人工序列德尔卑沙门氏菌特异性引物对SD2-f8CCTTCTTACTTCTCATTGGGGAC23926DNA人下序列德尔卑沙门氏菌特异性引物对SD2-r9AACATTGAAAAATTTACGGGmTGTT261027DNA.人工序刻德尔卑沙门氏菌特异性引物对SD3-f10TATTTCACAACTCTTTTGGAACTACTC271124DNA人工序列[0076]德尔卑沙门氏菌特异性引物对SD3-r11GCTAACAGATTGGTAGTCGGGAAG2421DNA人丄序列德尔卑沙门氏菌特异性引物对SDll-f12GTTAGCCGCAGGAACAAGAAS2113DNA人工序列德尔卑沙门氏菌特异性引物对SDll-r13CATTTGGCCCAGAACGTAGC20DNA[0077]人工序列德尔卑沙门氏菌特异性引物对SD12-f14ICTCGTTTCGGGAAAATAGGA211521DNA德尔卑沙门氏菌特异性引物对SD12-r15CTTGCTGTCGCAmJCCMA2:1

权利要求：1.一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因，RU61_00441、RU61_00445、RU61_00447、RU61_RS09205、RU61_RS06985,其特征在于：RU61_00441具有如SEQIDN0.1所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_00445具有如SEQIDNO.2所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_00447具有如SEQID冊.3所示的核苷酸序列或其特异性片段，冊61_1«09205具有如SEQIDNO.4所示的核苷酸序列或其特异性片段，RU61_RS06985具有如SEQIDNO.5所示的核苷酸序列或其特异性片段。2.用于扩增权利要求1所述靶基因的特异性引物对，其特征在于，所述特异性引物对分别为：301、502、503、5011、5012，其中，SDl-f:核苷酸序列如SEQIDNO.6所示、SDl-r:核苷酸序列如SEQIDNO.7所示；SD2-f:核苷酸序列如SEQIDNO.8所示、SD2-r:核苷酸序列如SEQIDNO.9所示；SD3-f:核苷酸序列如SEQIDNO.10所示、SD3-r:核苷酸序列如SEQIDNO.11所示；SDll-f:核苷酸序列如SEQIDNO.12所示、SDll-r:核苷酸序列如SEQIDNO.13所示；SD12-f:核苷酸序列如SEQIDNO.14所示、SD12-r:核苷酸序列如SEQIDNO.15所示。3.—种检测德尔卑沙门氏菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：51、提取样品DNA，PCR扩增；52、凝胶电泳检测扩增产物；53、比较电泳后条带，若在171bp、164bp、512bp、608bp和296bp位置有条带，则样品中含有德尔卑沙门氏菌。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于:所述凝胶电泳后171bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；164bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；512bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示;608bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.4所示296bp位置分离出的DNA片段，其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增过程中，25μ1包含有2XMaster12·5μ1，ΙΟμΜ引物对Ιμΐ，模板取1-5μ1，补ddH20至25μ1。6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增过程的反应程序为:94°C预变性10min，94°C变性30s，60°C退火30s，72°C延伸458,35个循环，72°：延伸1〇11^11。7.根据权利要求3所述的方法，其特征在于:所述凝胶电泳采用琼脂糖凝胶电泳。8.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：以25ylPCR反应体系计量，对于权利要求2所述的SDI、SD2、SD3、SD11和SD12引物，需要德尔卑沙门氏菌总DNA浓度彡2.685ngy1。9.一种用于检测德尔卑沙门氏菌的试剂盒，其特征在于:所述试剂盒包括权利要求2所述的特异性引物对。10.权利要求1所述的靶基因或权利要求2所述的特异性引物对或权利要求9所述的试剂盒在检测德尔卑沙门氏菌中的应用。

百度查询： 安徽科技学院 一种用于检测德尔卑沙门氏菌的靶基因、特异性引物对及检测方法和试剂盒

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