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申请/专利权人：上海长征医院;上海思路迪生物医学科技有限公司
摘要：本发明涉及一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法，通过磁珠法高选择性的分离外泌体中ecDNA，无需使用超速离心等复杂操作，也避免使用氯化铯等有毒试剂，能够适应自动化操作分离得到较高纯度ecDNA产物，极大地提高了实验效率，有效节省人力、时间成本。
主权项：1.一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法，其特征在于，包括：使用碱性洗涤磁珠法处理外泌体产物获得ecDNA产物；所述碱性洗涤磁珠法包括使用磁珠悬液II对外泌体裂解后的产物进行核酸吸附操作，所述外泌体裂解包括使用裂解液对外泌体产物进行裂解操作，所述裂解液包括蛋白酶抑制剂；使用洗涤液II对吸附有核酸的磁珠进行洗涤操作；使用洗涤液III对经过洗涤液II洗涤操作的磁珠进行洗涤操作；使用洗脱液对经过洗涤液III洗涤操作的磁珠进行洗脱操作，使磁珠上吸附的ecDNA被洗脱；所述裂解液包括终浓度为3至5mmolL的NH42SO4、0.15至3mmolL的NaCl、1至15mmolL的PMSF和体积比为1至10％的Tritonx-100；所述磁珠悬液II包括终浓度为1至10mgml的硅羟基磁珠、体积百分比为25至50％的甘油；所述洗涤液II包括终浓度为20至100mmolL的Tris，且所述洗涤液II的pH为10至12；所述洗涤液III包括浓度为10至20mmolL的Tris、终浓度为0.5至5mgmL的蛋白酶K、体积百分比浓度75至80％的乙醇；所述洗脱液包括终浓度为10至20mmolL的Tris，且所述洗脱液的pH为8.5。
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百度查询： 上海长征医院 上海思路迪生物医学科技有限公司 一种基于磁珠分离外泌体中ecDNA的方法
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