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申请/专利权人：上海海洋大学;南方海洋科学与工程广东省实验室(广州)

摘要：本发明公开了一种鲆鲽鱼类健康状况评价方法，包括：经养殖系统和监测养殖环境的前期准备后，将待评价的鲆鲽鱼放入养殖系统，依次通过抓捕和反抓捕行为、新陈代谢指标和急性应激后新陈代谢变化、应激孤独后食欲恢复行为、潜沙行为和昼夜节律行为进行健康评价。根据鲆鲽鱼生理和行为特征的个体差异，采用多项评价和分级评估并建立健康评价标准，对人造养殖环境和自然环境中的鲆鲽鱼群体健康状况进行综合评价，提高育种技术的同时促进鲆鲽鱼养殖管理和养殖业的健康持续发展。

主权项：1.一种鲆鲽鱼类健康状况评价方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、养殖系统用漂白粉消毒后，经淡水冲洗并浸泡，注入盐度为25‰–35‰的过滤天然海水或经稀释的浓缩海水，其循环水系统内投放酵母膏粉和光合细菌后运转若干天，培养过滤槽中的生物膜；S2、监测养殖环境，使其达到预先设定的环境指标，所述预先设定的环境指标为：所述养殖系统内的水温为17–20℃，光照时间和黑暗时间分别为12小时，pH值为7.5–8.5，溶氧浓度≥6.8mgL，氨氮浓度≤0.1mgL，亚硝氮浓度≤0.1mgL，硫化物浓度≤0.1mgL；S3、环境指标检测合格后，将鲆鲽鱼先放入含有聚维酮碘的海水的消毒池中浸泡，再用曝气海水浸洗，放入上述养殖系统；S4、用渔网抓捕法和空气暴露法对步骤S3中鲆鲽鱼进行首轮评价：评价前继续停止投喂食物，早上9:00前待水池水流平稳、鱼群安静后开始初步评价，对鲆鲽鱼进行第一轮评价时，先用渔网在其附近滑动模拟抓捕，在渔网缓慢接近的过程中迅速逃跑的鱼行为记为1，在渔网接触到鱼体后逃跑的鱼行为记为0，在模拟抓捕时渔网触碰到鱼体仍无反应的鱼行为记为-1；再进行渔网抓取评价，用渔网迅速将鲆鲽鱼逐个捞入网中，并捞出水面70秒，分别记录抓入渔网中的鱼从脱离水面到开始挣扎的时间和70秒内的挣扎次数，开始挣扎时间按由短到长排列，取前三分之一的鲆鲽鱼记1分，中间三分之一的鲆鲽鱼记0分，最后三分之一的鲆鲽鱼记-1分；挣扎次数按由高到低排列取前三分之一的鲆鲽鱼记1分，中间三分之一的鲆鲽鱼记0分，最后三分之一的鲆鲽鱼记-1分，将两组数据相同的鲆鲽鱼放在同一个系统，第一轮评价后的鱼群从应激中恢复12-24小时；S5、用全自动间断流动呼吸运动计量仪对鲆鲽鱼进行第二轮健康评价：所述全自动间断流动呼吸运动计量仪开始使用前每隔两天用温和的漂白液消毒，用淡水冲洗3次并浸泡冲洗干净，注入充分曝气的盐度为25‰–35‰的过滤天然海水，使用TMP-REG温度监测和调控设备进行温度控制；监测测量环境，使其达到预先设定的环境指标，所述预先设定的环境指标为：监测系统内的水温为18±0.1℃，pH值为7.5–8.5，溶氧浓度≥6.8mgL，氨氮≤0.1mgL，亚硝氮≤0.1mgL，硫化物≤0.1mgL；溶氧监测室大小为48cm×28cm×4cm，可容纳水体体积为6.3L，监测系统中的水体流动由LDAQ-4控制，溶氧使用电氧探头持续监测，监测周期设置10分钟为一个循环，其中第0-4分钟为外部蓄水箱缓慢向监测室内加入新水的过程，以确保监测室水体的溶解氧达到100％，第5分钟为等待呼吸室数据稳定的时间，第6-10分钟为监测室监测水体中溶氧变化，使用AutoRespTMsoftware收集温度和溶氧数据，并计算出相应的呼吸值，开始前系统中不放鱼至少进行3个循环用以监测水体中由细菌造成的背景耗氧值，控制背景耗氧值在待测成鱼最大新陈代谢率值的5％以内；测定鲆鲽鱼最大新陈代谢率、标准新陈代谢率和绝对需氧范围作为鲆鲽鱼有氧呼吸最大能力指标：早上8点前，将鲆鲽鱼从养殖池中放入到预先设定环境指标的矩形暂养室内，用渔网持续进行追捕3分钟，待测鱼减速或者停止游泳时用渔网触碰鱼尾部刺激其继续进行爆发式游动；3分钟过后，所有的个体体力完全耗尽，立即用渔网将鱼平托出水面1分钟，并在30秒内放入监测室，监测室内所有气体排出上锁，并用黑色挡板覆盖监测室表面，恢复阶段外界打扰降至最小化，进行24小时，其中呼吸最大值为最大新陈代谢率，在第1-2个循环出现呼吸达到稳定时为标准新陈代谢率，用最大新陈代谢率减去标准新城代谢率即为绝对需氧范围，记录每条鱼的最大新陈代谢率、标准新陈代谢率和绝对需氧范围作为待评估鱼的呼吸代谢指标；根据最大新陈代谢率、标准新陈代谢率和绝对需氧范围由高到低排列，分别取前三分之一的鱼记1分，中间三分之一的鱼记0分，最后三分之一的鱼记-1分；S6、在步骤S5中第三阶段进行急性刺激下的呼吸监测并记录其耗氧变化，作为评价鲆鲽鱼急性应激条件下呼吸选择策略指标：在步骤S5中24小时结束后，系统的第6-10分钟溶氧变化监测期，进行一个5分钟的急性刺激下耗氧变化评价，作为鲆鲽鱼急性应激条件下新陈代谢变化指标；开始前将监测室表面的黑色挡板移除，用手在灯光下产生的阴影模拟捕食者对鱼进行干扰，30秒为一个循环，第0-15秒测试人员不断在监测室上方移动手，其造成的阴影模拟自然条件下的捕食者，第16-30秒停止干扰，然后连续5分钟，该过程始终监测水体溶解氧气变化，记录受到干扰时鲆鲽鱼的耗氧值，按照干扰时的耗氧变化，耗氧明显上升的记为1分，耗氧没有变化的记为0分，耗氧下降的记为-1分；将鲆鲽鱼逐个放入单独的养殖桶中，养殖桶用盖子遮住一半桶口半避光放置，每个养殖桶均与养殖池塘的供水系统相连保证水质状况相同，鱼在养殖桶里从第二轮评价应激中恢复12-24小时；S7、用诱饵钓投对鲆鲽鱼个体逐个进行应激孤独后食欲恢复状况评价：经过禁食后对鲆鲽鱼进行投食反应健康评价，投喂在光照强度为40LX的养殖桶或鱼池未遮盖的一侧进行，准备一个鱼竿，用小木夹代替鱼线一端的鱼钩，另一段系在鱼竿上，木夹上夹一条要投喂的小鱼，移动鱼竿拖动小鱼在水面游动，同时观察池底待测成鱼反应，如果在30秒内对猎物发起扑食的成鱼记为1，2分钟内对猎物发起扑食的成鱼记为0，超过2分钟对食物没有兴趣或无捕食反应的鱼记为-1；S8、用潜沙行为对鲆鲽鱼进行评价：记录鲆鲽鱼开始潜沙行为的时间，开始潜沙时间由短到长排列，取前三分之一的鲆鲽鱼记1分，中间三分之一的鲆鲽鱼记0分，最后三分之一的鲆鲽鱼记-1分，然后进行沙粒覆盖面积评价，沙粒覆盖面积由多到少，取前三分之一的鲆鲽鱼记1分，中间三分之一的鲆鲽鱼记0分，最后三分之一的鲆鲽鱼记-1分；S9、用昼夜节律行为检测仪对鲆鲽鱼昼夜节律行为进行评价：开始使用前一天设备用温和的漂白液消毒，用淡水冲洗并浸泡干净，大小为70cm×50cm×30cm的浅色养殖缸作为监测室；早上8点前，在每个监测室内分别注入52L充分曝气的盐度为25‰–35‰的过滤天然海水，鲆鲽鱼逐个平缓地放置在监测室中，光周期时间为12小时光照12小时黑暗，摄像机跟踪每一个被监控的鲆鲽鱼的游泳距离，每分钟一次报告每一条鱼的游泳距离，每条鱼连续监测24小时，然后捞出放回对应的养殖系统中，让其在应激中恢复12-24小时；根据白天是否存在明显运动和夜晚运动总距离作为评分指标，白天不运动记1分，存在不明显运动记0分，存在明显运动记-1分；夜晚运动距离按由高到低排列，取前三分之一的鲆鲽鱼记1分，中间三分之一的鲆鲽鱼记0分，最后三分之一的鲆鲽鱼记-1分；S10、依据步骤S1至步骤S9中抓捕-反抓捕行为、新陈代谢指标和急性应激后新陈代谢变化、应激孤独后食欲恢复行为、潜沙行为和昼夜节律行为的结果，用XLSTAT2014中的主成分分析得到不同个体与这些行为测试指标的相关性分布图，得出三个不同健康状况的集合：特征值在2以上的为活泼鱼，在-2到2的为中间型鱼，在-2以下的为不活泼鱼；再综合新陈代谢结果得出不同个体的健康状况，按照得分由高到低，综合得分在9分以上为活泼鱼，在-9到9分为中间型鱼，在-9分以下为不活泼鱼。

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