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申请/专利权人：复旦大学
摘要：本发明属于医学检测技术领域，具体为一种基于TdT信号放大的结直肠癌外泌体检测方法和体系。本发明采用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）对引物探针3’端进行链延伸反应，催化聚合产生长链生物素修饰的polyA；然后结合亲和素修饰的辣根过氧化物酶，催化3,3',5,5'‑四甲基联苯胺（TMB）进行显色反应，并在450nm处产生紫外吸收峰。本发明可以用于临床血清样本的检测，并成功区分结直肠癌患者血清和正常人血清。本发明的方法具有快速高效、特异性强、灵敏度高，生物相容性好，可视化程度高，且不需要大型仪器设备和昂贵试剂，具有很好的应用前景。
主权项：1.一种基于TdT酶信号放大的非诊断目的的结直肠癌外泌体检测方法，其特征在于，具体步骤为：（1）金纳米粒子探针合成：在纳米金溶液中加入3’端修饰巯基的核酸适配体和5’端修饰巯基的引物，老化；（2）包被：按照50-150μL孔将A33抗体加入到96孔板中，孵育，然后移除多余抗体；（3）封闭：按照150-250μL孔将封闭液加入到96孔板中，静置孵育，然后移除封闭液，随后洗涤并拍干；（4）外泌体捕获：向每孔中加入50-150μL外泌体溶液，孵育，然后洗涤并拍干；（5）信号放大：向每孔中加入50-150μL金纳米粒子探针，孵育，然后洗涤并拍干；再加入TdT酶、缓冲液、生物素修饰的dATP和超纯水，35-40℃孵育一段时间，洗涤并拍干；在TdT酶作用下，金纳米粒子探针中的引物序列的3’端进行链延伸反应形成多条生物素修饰的dATP长链；（6）检测反应：按照50-150μL孔将亲和素修饰的辣根过氧化物酶加入到96孔板中，孵育，然后移除，随后洗涤并拍干，最后按照50-150μL孔将3,3',5,5'-四甲基联苯胺单组份显色液加入到96孔板中进行显色反应；（7）终止：按照25-75μL孔加入1-2M硫酸，终止反应；（8）读数：使用酶标仪进行读数，记录450nm处的OD值；步骤（1）中所述引物的序列为SEQIDNO.1所示，所述核酸适配体的序列为SEQIDNO.2所示。
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百度查询： 复旦大学 一种基于TdT信号放大的结直肠癌外泌体检测方法和体系
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