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申请/专利权人:重庆医科大学
摘要:本发明公开了一种基于双立足点介导的链置换反应检测HBV的荧光传感器及其制备与应用,基于靶物质触发的双立足点介导的链置换反应DTSDR体系构建而成,所述体系包括底物复合物、燃料链FS和靶物质T链,底物复合物包括底物链ST、辅助链AS‑FAM和封闭链BK‑BHQ1;其中,靶物质与底物复合物结合,通过DTSDR取代AS和BK,暴露出FS可识别的中间立足点;FS与暴露的中间立足点杂交置换出靶物质;置换出的靶物质结合其他底物复合物触发下一个循环反应,从而产生大量荧光信号,通过检测荧光信号即可获知靶物质含量,实现HBV的检测。本发明的传感器具有无酶、特异性好、灵敏度高、检测速度快的优点,适用于现场即时检测。
主权项:1.一种基于双立足点介导的链置换反应检测乙型肝炎病毒HBV的荧光传感器,其特征在于,基于靶物质触发的双立足点介导的链置换反应体系构建而成,所述链置换反应体系包括底物复合物、燃料链FS和靶物质T链,所述底物复合物包括底物链ST、带有荧光报告基团的辅助链AS和带有荧光淬灭集团的封闭链BK,将所述底物复合物加入到荧光传感系统中,靶物质可与底物复合物的双立足点结合,并通过立足点介导的链置换反应取代辅助链AS和封闭链BK,暴露出燃料链FS可识别的中间立足点区域;燃料链FS与暴露的中间立足点区域杂交置换出靶物质T链;置换出的靶物质结合其他底物复合物,触发下一个循环反应,从而产生大量的荧光信号,通过检测荧光信号即可获知靶物质的含量,实现HBV的检测;所述底物链ST的核苷酸序列为:5'-TTTTTTACCGTCCCCAAGAAGATCTGCCGT-3'SEQIDNO.1;所述辅助链AS的核苷酸序列为:5'-TTGGGGACGi6FAMdTTTTTT-3'SEQIDNO.2;所述封闭链BK的5'端带有荧光淬灭基团BHQ1,其核苷酸序列为:5'-BHQ1-GCAGATCTTC-3'SEQIDNO.3;所述燃料链FS的核苷酸序列为:5'-TTTTTTTGGGGACGGCAGATCTTC-3'SEQIDNO.4;所述靶物质T链的核苷酸序列为:5'-ACGGCAGATGAAGAAGGGGACGGTA-3'SEQIDNO.5。
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