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申请/专利权人：内蒙古医科大学
申请日：2023-02-08
公开（公告）日：2023-06-09
公开（公告）号：CN116240242A
主分类号：C12N15/867
分类号：C12N15/867;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2023.06.27#实质审查的生效;2023.06.09#公开
摘要：本发明提供了CAR‑T靶向LMP1和EBNA‑1治疗鼻咽癌的细胞系构建及动物实验方法，包括以下步骤：S1、构建CMV‑LMP1‑CAR‑EBNA‑1载体，琼脂糖凝胶电泳回收，连接产物转化，将构建好的质粒进行测序分析，经测序分析LMP1和EBN‑1成功插入载体中；S2、慢病毒载体抽提和质检；S3、慢病毒包装浓缩，对293T细胞进行冻存，对293T细胞进行传代，对293T细胞进行复苏；S4、293T细胞系构建，准备目的细胞，提取293T细胞系蛋白进行Westernblot检测，CCK‑8法检测CAR‑T细胞对鼻咽癌细胞的作用，通过检测发现病毒感染T细胞后，T细胞表面抗原无变化，然后检测对鼻咽癌细胞的抑制作用，通过检测发现CAR‑T细胞对鼻咽癌细胞有很好的抑制作用，然后构建裸鼠双侧成瘤实验，发现CAR‑T细胞对鼻咽癌细胞有很好的抑制作用。
主权项：1.CAR-T靶向LMP1和EBNA-1治疗鼻咽癌的细胞系构建，其特征在于，包括以下步骤：S1、构建CMV-LMP1-CAR-EBNA-1载体，琼脂糖凝胶电泳回收，连接产物转化，挑单克隆，摇菌，最后送测序，将构建好的质粒进行测序分析，经测序分析LMP1和EBN-1成功插入载体中；S2、慢病毒载体抽提和质检；S3、慢病毒包装浓缩，对293T细胞进行冻存，对293T细胞进行传代，对293T细胞进行复苏；S4、293T细胞系构建，准备目的细胞，提取293T细胞系蛋白进行Westernblot检测，CCK-8法检测CAR-T细胞对鼻咽癌细胞的作用；S5、CAR-T细胞构建，抽取病人外周血60ml，送至实验室进行CAR-T细胞的生产，CAR-T细胞活化，转染病毒，通过CCK-8法检测对肿瘤细胞的增殖情况的影响，从而完成治疗鼻咽癌的细胞系构建。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 内蒙古医科大学 CAR-T靶向LMP1和EBNA-1治疗鼻咽癌的细胞系构建及动物实验方法
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