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申请/专利权人：济南大学

摘要：本发明涉及一种基于葡萄糖酸分解ZIF‑8屏蔽壳层的光电化学神经元特异性烯醇化酶传感器的制备方法及应用。本发明具体是在氧化铟锡（ITO）导电玻璃上修饰In2O3纳米颗粒，通过连续离子层吸附法（SILAR）在In2O3上生长钒酸铋（BiVO4），形成的敏化结构可增加光的捕获，促进光生电子空穴的分离效率，具有强的光电化学性能，在In2O3BiVO4敏化层上修饰ZIF‑8作为信号屏蔽层，通过制备的二氧化硅负载的葡萄糖氧化酶分解葡萄糖产生葡萄糖酸，从而使ZIF‑8部分降解。构建了一种分离式基于ZIF‑8屏蔽壳层降解控制的光电化学传感器，实现了对神经元特异性烯醇化酶的灵敏检测，该方法对早期诊断和检测小细胞肺癌具有重要意义。

主权项：1.一种基于控制释放ZIF-8屏蔽壳层的光电化学NSE传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1将2.5cm×0.8cm的ITO导电玻璃依次用丙酮、乙醇和超纯水分别超声清洗30min，氮气吹干；2将10µL、5-8mgmL分散均匀的In2O3的悬浮液滴涂在ITO导电玻璃上，在室温下晾干；3然后分别将涂覆In2O3的ITO导电玻璃在15-25mMBiNO3和15-20mMNH4VO3溶液中蘸60s，称之为一个循环，每一个循环要用超纯水轻轻冲洗，并且重复上述循环20-30次；此时电极变为In2O3NPsBiVO4NPs电极；4在In2O3NPsBiVO4NPs电极上滴涂10µLZIF-8溶液得到In2O3NPsBiVO4NPsZIF-8电极；5首先取80-100µL、1µgmLNSE捕获抗体Ab1溶液滴加到96-微孔板中，4℃冰箱保湿过夜，之后用磷酸盐缓冲溶液（PBS）洗涤三次；6继续加入100µL、质量分数为0.1~1.0%的牛血清白蛋白溶液，室温下孵育1h以封闭未结合Ab1的非特异性活性位点；7继续用PBS洗涤两到三次，加入100µL、0.1pgmL~10ngmLNSE抗原溶液，室温下孵育1h；8继续加入100µLSiO2-GOx-Ab2的孵化物，室温下孵育1h，用PBS洗涤两到三次后，加入10-25mM的葡萄糖溶液，孵育1h，取孵育后的溶液10µL滴涂在In2O3NPsBiVO4NPsZIF-8电极表面，4℃冰箱中保湿后晾干，制得了修饰完全的ITO电极，即一种检测NSE分离式光电化学免疫传感器；所述In2O3NPs的制备，步骤如下：140-146.5mg的五水合硝酸铟（InNO33·5H2O）与0.1-1.0g尿素彻底混合，溶于8-13mL二甘醇0-2mL超纯水的混合溶液中，磁力搅拌至完全溶解，转移至含有聚四氟乙烯内胆的反应釜中加热至150-200℃反应24h，待温度冷却到室温后，得到的产品分别用水和乙醇离心清洗几次，最后在真空干燥箱中干燥过夜后得到In2O3NPs；所述BiVO4NPs的制备，步骤如下：BiVO4NPs的制备是通过连续的离子吸附与反应：分别将10µL、5-10mgmL分散均匀的In2O3NPs的悬浮液滴涂在ITO导电玻璃上，在室温下晾干；然后分别将涂覆In2O3NPs的ITO导电玻璃在15-25mMBiNO3和15-25mMNH4VO3溶液中蘸60s，称之为一个循环，每一个循环要用超纯水轻轻冲洗，并且重复上述循环10-20次，BiVO4NPs合成成功，此时电极变为In2O3NPsBiVO4NPs电极；所述ZIF-8的制备，步骤如下：ZIF-8的制备如下所示：30-40mM二水合乙酸锌与150-160mM2-甲基咪唑溶解在5mL水中震荡3-5min，在In2O3NPsBiVO4NPs电极上滴涂10µLZIF-8溶液，保湿12h得到In2O3NPsBiVO4NPsZIF-8电极；所述SiO2-GOx-Ab2检测神经元特异性烯醇化酶抗体复合物溶液的制备，步骤如下：1）SiO2纳米微球的制备：SiO2纳米微球的制备：65-75mL的无水乙醇中加入3-5mL水和5-7mL的原硅酸乙酯，在搅拌的过程中以每分钟2mL的速度滴加25%的浓氨水10-20mL，得到的溶液40℃下回流4h.得到白色产品经过水和乙醇离心清洗几次，最后在真空干燥箱中干燥过夜后得到SiO2微球；氨化的SiO2纳米微球的制备：将1mLAPTES和0.5-1.0gSiO2加入100mL无水甲苯中，然后将得到的溶液在超声处理30min后转入70-90℃的高压釜中反应24h，然后将得到的悬浮液离心，用无水乙醇洗涤3次，然后在60℃的真空中干燥过夜，得到氨基SiO2粉末；醛化的SiO2纳米微球的制备：氨化的SiO2纳米微球5-10mgmL溶液2mL，加入5mL戊二醛，25℃下搅拌6h，得到醛化的SiO2纳米微球；2）SiO2-GOx-Ab2NSE检测抗体复合物溶液的制备：取5-10mgmL的醛化SiO2溶液1mL，1mL10µgmL的Ab2溶液，1mL，6-10mgmL的葡萄糖氧化酶GOx,在4℃恒温振荡箱中恒温孵育12h，最后，用pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液离心清洗3次，并分散于2mL的pH为7.4的磷酸盐缓冲溶液中。

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