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通过抑制肌肉组织mstn基因表达获得快长青鲫的方法 

申请/专利权人:湖南文理学院

申请日:2019-08-10

公开(公告)日:2023-09-22

公开(公告)号:CN110438153B

主分类号:C12N15/85

分类号:C12N15/85;A01K67/027

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2023.09.22#授权;2019.12.06#实质审查的生效;2019.11.12#公开

摘要:本发明属于基因表达技术领域,公开了一种通过抑制肌肉组织mstn基因表达获得快长青鲫的方法,构建转基因载体,在转基因载体中肌肉组织特异表达启动子和csy4系统相结合,在启动子的下游插入靶基因的反向DNA序列;当转基因元件整合到宿主基因组后,转录产生两段和靶基因mRNA不同部位互补的RNA片段,形成的antisense‑RNAmRNA二聚体被内源性核酸酶识别并切割降解,导致靶基因mRNA水平的降低,获得所需的某些表型或生化特征。通过实验表明,两段反义RNA导致实验组mstnmRNA水平显著降低;分别在出膜后取样,每次称10条鱼,取平均体重;出膜后20天对照组和实验组,实验组中,鱼个体较为粗壮,体长和体高均显著大于对照鱼。

主权项:1.一种通过抑制肌肉组织mstn基因表达获得快长青鲫的方法,其特征在于,所述通过抑制肌肉组织mstn基因表达获得快长青鲫的方法包括以下步骤:第一步,构建转基因载体,在转基因载体中的启动子下游插入靶基因的反向DNA序列;第二步,将反义RNA技术和csy4系统相结合,使之一次产生2种不同的反义RNA,同时作用于目的基因;当转基因元件整合到宿主基因组后,转录产生两段和靶基因mRNA不同部位互补的RNA片段,形成的antisense-RNAmRNA二聚体被内源性核酸酶识别并切割降解导致靶基因mRNA水平的降低,获得所需的表型或生化特征;所述通过抑制肌肉组织mstn基因表达获得快长青鲫的方法还包括青鲫mstn基因部分序列克隆,包括:提取青鲫肌肉组织总RNA、反转录为cDNA、以cDNA为模板,引物为:SEQIDNO:1和SEQIDNO:2;识别后能从识别序列下游将RNA切断,序列转录后,转录表达出CSY4蛋白,并将RNA切成3段,其中csy4RNA被降解,另外两段RNA则为mstn基因的反义RNA序列,反义RNA序列和mstnmRNA互补结合形成部分双链,导致降解,同时阻止转录继续进行;经过PCR扩增后获得序列SEQIDNO:3;含有反义mstn基因载体的序列为SEQIDNO:4。

全文数据:

权利要求:

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