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申请/专利权人：培力(南宁)药业有限公司

摘要：本发明属于药品质量控制技术领域，具体涉及一种猪苓汤物质基准的质量控制方法，包括确立制备工艺和建立质量评价体系。该质量控制方法采用薄层色谱鉴别、含量测定、特征图谱方法相结合，具体包括建立氨基酸类、三萜类高效液相色谱特征图谱以及氨基酸类含量的检测方法、测定待测多糖含量和薄层鉴别等方面，通过特征图谱中特征峰的相对保留时间以及氨基酸类含量等来控制和评价其质量。本发明建立了全面控制猪苓汤物质基准的质量评价体系，为猪苓汤复方制剂的合理开发应用提供了研究基础。

主权项：1.一种猪苓汤物质基准的质量控制方法，其特征在于，建立氨基酸类、三萜类高效液相色谱特征图谱以及氨基酸类含量的检测方法，通过特征图谱中特征峰的相对保留时间以及氨基酸类含量来控制和评价其质量；具体包括如下步骤：1氨基酸类含量的检测方法和氨基酸类高效液相色谱特征图谱建立，具体如下：①高效液相色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.1molL醋酸钠溶液为流动相B；以水为流动相C，按下表1中的规定进行梯度洗脱；检测波长为254nm，柱温为43℃；进样量5μl，理论板数按L-羟脯氨酸峰计算应不低于4000；表1梯度洗脱表 ②制备参照物溶液和供试品溶液，然后分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的含量，同时供试品色谱中应呈现12个特征峰，并应与对照品参照物色谱中的12个特征峰保留时间相对应；③测定15批猪苓汤物质基准供试品溶液，记录图谱，选定稳定、重现性好的12个共有峰作为特征峰，以L-羟脯氨酸色谱峰为参照峰，计算色谱图中各特征峰的相对保留时间，建立对照特征图谱，得到由其共有特征峰构成的特征图谱，所得图谱中，特征峰有12个，2号峰为L-羟脯氨酸；所述12个特征峰的相对保留时间如下：峰1：0.684，峰2：1.000，峰3：1.237，峰4：1.338，峰5：1.623，峰6：1.770，峰7：1.891，峰8：2.064，峰9：3.113，峰10：3.756，峰11：3.834，峰12：4.671；2建立三萜类高效液相色谱特征图谱，具体如下：①高效液相色谱检测条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.05％磷酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为0.8mlmin；柱温为30℃；检测波长为248nm，进样量10μl，理论板数按猪苓酮B峰计算应不低于10000；梯度洗脱表 ②制备参照物溶液和供试品溶液，分别精密吸取参照物溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，供试品色谱中应呈现9个特征峰，并应与对照品参照物色谱中的4个特征峰保留时间相对应；与猪苓酮B参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内；③测定17批猪苓汤物质基准供试品溶液，记录图谱，以9个共有峰作为特征峰，以猪苓酮B参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，建立对照特征图谱，得到由其共有特征峰构成的特征图谱，所得图谱中，特征峰有9个，峰1，即S峰，为猪苓酮B，峰2为猪苓酮A，峰6为23-乙酰泽泻醇C，峰8为去氢土莫酸；所述9个特征峰的相对保留时间如下：峰1：1.00，峰2：1.13，峰3：1.41，峰4：1.67，峰5：1.77，峰6：2.20；峰7：2.55，峰8：2.58，峰9：2.61；步骤1所述氨基酸类含量的检测方法和氨基酸类高效液相色谱特征图谱建立中，所述的参照物溶液和供试品溶液的制备方法是：参照物溶液的制备：取L-羟脯氨酸对照品、甘氨酸对照品、丙氨酸对照品、L-脯氨酸对照品适量，精密称定，加0.1molL盐酸溶液制成每1ml分别含L-羟脯氨酸80μg、甘氨酸0.16mg、丙氨酸70μg、L-脯氨酸0.12mg的溶液，作为对照品参照物溶液1；取苏氨酸对照品、精氨酸对照品、盐酸赖氨酸对照品、丝氨酸对照品适量，精密称定，加0.1molL盐酸溶液制成每1ml分别含以上4个对照品各90μg的溶液，作为对照品参照物溶液2；取缬氨酸对照品、谷氨酸对照品、亮氨酸对照品、异亮氨酸对照品适量，精密称定，加0.1molL盐酸溶液制成每1ml分别含以上4个对照品各90μg的溶液，作为对照品参照物溶液3；供试品溶液的制备：取本品粉末0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.1molL盐酸溶液25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用0.1molL盐酸补足减失的重量，摇匀，精密量取5ml至具塞锥形瓶中，加入盐酸5ml，加热回流水解3h，放冷，移至蒸发皿，用水10ml分次洗涤，洗液并入蒸发皿中，蒸干，残渣加0.1molL盐酸溶液溶解，转移至25ml量瓶，加0.1molL盐酸溶液至刻度，摇匀，即得；步骤2建立三萜类高效液相色谱特征图谱中，所述的参照物溶液和供试品溶液的制备方法是：参照物溶液的制备：取猪苓酮B、猪苓酮A、23-乙酰泽泻醇C、去氢土莫酸对照品适量，配制成每1ml分别含20μg、20μg、5μg、30μg的混合对照品溶液，作为对照品参照物溶液；供试品溶液的制备：取本品粉末5g，加甲醇50ml，超声处理30分钟，放冷，滤过蒸干，残渣用15ml水溶解，转移至分液漏斗，氯仿振摇萃取3次，每次15ml，合并氯仿液，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至2ml容量瓶，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；所述的猪苓汤物质基准的质量控制方法，通过氨基酸类、三萜类特征峰的相对保留时间以及氨基酸的含量来控制和评价猪苓汤物质基准的质量：1真伪鉴定：氨基酸类：供试品色谱中应呈现12个特征峰，并应与对照品参照物色谱中的12个特征峰保留时间相对应；三萜类：供试品色谱中应呈现9个特征峰，并应与对照品参照物色谱中的4个特征峰保留时间相对应；与猪苓酮B参照物峰相对应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的±10％范围之内，规定值为：峰1：1.00，峰2：1.13，峰3：1.41，峰4：1.67，峰5：1.77，峰6：2.20；峰7：2.55，峰8：2.58，峰9：2.61；2质量评价：每1g物质基准含L-羟脯氨酸不得少于60mg，甘氨酸不得少于120mg，丙氨酸不得少于50mg，L-脯氨酸不得少于70mg；以L-羟脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、L-脯氨酸的总量评价猪苓汤物质基准的优劣。

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