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申请/专利权人：烟台市森林资源监测保护服务中心(烟台沿海防护林省级自然保护区管理服务中心、烟台市林业科学研究所)

摘要：本发明中公开了一种宜昌荚蒾叶片诱导愈伤组织及快繁体系建立的方法，取宜昌荚蒾带芽茎段建立无菌体系，利用带芽茎段经展叶培养生成的无菌叶片直接作为外植体进行接种，降低了污染率，避免了对叶片直接消毒导致的外植体失活，提高外植体接种成活率，为宜昌荚蒾组织培养提供了大量无菌供试材料，简化了操作程序；本发明实现了叶片快速脱分化，6d开始形成愈伤组织，诱导15d获得色泽透明浅绿、结构致密的愈伤组织，诱导率100％；再分化形成多个丛生芽，有效茎高度超过3cm，叶片5‑8片，增殖系数为8，高于常规繁殖系数。本发明能在短期内获得大量完整宜昌荚蒾植株，提高了育苗效率，有效解决宜昌荚蒾繁育困难的问题，并为宜昌荚蒾的工厂化育苗提供技术支持。

主权项：1.一种宜昌荚蒾叶片诱导愈伤组织及快繁体系建立的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将宜昌荚蒾植株的带芽茎段进行无菌处理后嵌入展叶培养基中进行展叶培养10d；所述展叶培养基为：N6+6-BA1.2mgL+IBA0.5mgL+IAA0.2mgL+蔗糖30.0gL+琼脂7gL，pH5.8；S2、将S1中带芽茎段在展叶培养后展开的叶片作为外植体，转接到诱导培养基中进行愈伤组织诱导培养，所述诱导培养基为：12MS+6-BA0.05mgL+NAA1.0mgL+蔗糖20.0gL+琼脂7gL，pH5.8；培养温度为25±2℃，湿度为60％，光照强度为1800lx，光处理时长为8hd，暗处理时长为16hd，诱导培养15d形成宜昌荚蒾愈伤组织；S3、无菌条件下，将S2中的宜昌荚蒾愈伤组织进行再分化培养，培养14d后形成不定芽；所述再分化培养的培养基为：N6+6-BA0.5mgL+TDZ0.7mgL+IBA0.5mgL+IAA0.2mgL+蔗糖30.0gL+琼脂7gL，pH5.8；从愈伤组织上剪取不定芽进行增殖培养，增殖培养重复3-4次，所述不定芽增殖培养的培养基为：N6+6-BA0.5mgL+TDZ0.7mgL+IBA0.5mgL+IAA0.2mgL+蔗糖30.0gL+琼脂7gL，pH5.8；再将增殖培养10d后的不定芽转接至生根培养基中进行生根培养，所述生根培养基为：12MS+6-BA0.05mgL+NAA0.50mgL+活性炭1.0gL+蔗糖15.0gL+琼脂8gL，pH6.2；培养15d后形成生根的宜昌荚蒾完整植株。

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权利要求：

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