申请/专利权人：杜克大学

申请日：2018-02-21

公开（公告）日：2024-04-26

公开（公告）号：CN110536960B

主分类号：C12N1/00

分类号：C12N1/00;C12N1/21;C12N15/09

优先权：["20170221 US 62/461,436"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.26#授权;2019.12.27#实质审查的生效;2019.12.03#公开

摘要：本发明提供了用于在基因工程微生物中大规模快速生产化学品的组合物和方法。还提供了能够快速优化微生物生产菌株的高通量代谢工程平台。该平台弥合了目前体内与体外生物生产方法之间的差距，依赖于活性代谢网络的动态最小化。

主权项：1.一种从遗传修饰的微生物GMO中生产产物的多阶段发酵生物工艺，包括：鉴定用于产生产物的GMO；在生长阶段，使所鉴定的GMO在培养基中生长，所述GMO包括：i.生产途径，其包含至少一种用于产物生物合成的酶；以及ii.合成代谢阀SMV组合，用于在诱导所述合成代谢阀时减少或消除所述GMO中通过多个代谢途径的通量，所述SMV包括：a沉默SMV，其使编码酶的基因的基因表达沉默，或b蛋白水解SMV，其控制酶的蛋白水解；过渡到生产性稳定阶段，与缺乏所述生产途径或所述SMV的微生物相比，在该阶段所述GMO的生长被减慢或停止，产物生产被提高，通过至少诱导所述SMV进入所述生产性稳定阶段；以及生产产物，其中所述合成代谢阀组合产生遗传修饰的微生物，所述遗传修饰的微生物具有应对环境条件变化的稳健性，稳健性评分大于0.6，其中所述稳健性评分通过以下方法计算：在多种不同的葡萄糖浓度和氧转移率条件下生产所述产物，确定所得产物的浓度的相对标准偏差RSD和最大偏差[maxDev]，通过公式1计算所述稳健性评分，公式1：所述产物选自氨基酸、乙酸酯、乙偶姻、丙酮、丙烯酸、苹果酸酯、脂肪酸乙酯、类异戊二烯、甘油、乙二醇、乙烯、丙烯、丁烯、异丁烯、乙酸乙酯、乙酸乙烯酯、1,4-丁二醇、2,3-丁二醇、丁醇、异丁醇、仲丁醇、丁酸酯、异丁酸酯、2-OH-异丁酸酯、3-OH丁酸酯、乙醇、异丙醇、D-乳酸、L-乳酸、丙酮酸、衣康酸、乙酰丙酸、葡萄糖酸、戊二酸、己内酰胺、己二酸、丙醇、杂醇、1,2-丙二醇、1,3-丙二醇、甲酸、富马酸、丙酸、琥珀酸、戊酸、马来酸和聚羟基丁酸酯，通过所述沉默代谢阀进行沉默的酶和通过所述蛋白水解合成代谢阀进行蛋白水解的酶均由选自以下的基因进行编码：fabI、gltA、ldp、zwf和udhA。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 杜克大学 用于稳健动态代谢控制的组合物和方法

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