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申请/专利权人：中国人民解放军总医院第六医学中心
申请日：2024-01-18
公开（公告）日：2024-05-10
公开（公告）号：CN118006810A
主分类号：C12Q1/689
分类号：C12Q1/689;C12Q1/6844;C12N15/11;C12R1/63
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.28#实质审查的生效;2024.05.10#公开
摘要：本发明公开一种用于现场及床边诊断副溶血性弧菌核酸检测试剂盒及检测方法，本发明首先利用RPA实现toxRDNA片段的大量扩增，然后将扩增片段通过T7RNA聚合酶体外转录为单链ssRNA，CrRNA与靶标ssRNA互补结合后激活Cas13a蛋白的附带切割活性对RNA报告基团切割，结合LFD实现结果可视化，完成检测。该试剂盒检测过程中整个反应在39℃恒温条件下进行，50分钟内即可通过试纸条肉眼判读结果。该诊断试剂盒具有灵敏，特异，便携，检测简便易上手等优点，适用于副溶血性弧菌患者的临床诊断及疫区的食品和环境评估。
主权项：1.一种副溶血性弧菌核酸检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：RPA冻干颗粒：噬菌体重组酶UvsX及其辅助因子UvsY、DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白gp32、dNTPS；缓冲液1：RehydrationBuffer；T7RNA聚合酶；醋酸镁；RPA反应引物：PrimerA：AACTCATTTGTACTGTTGAACGCCTAAGCCC；PrimerB：AGGTACTACTGGCGCTTCTGGTTCAACGATT；缓冲液2：HEPES缓冲剂；氯化镁；cas13a蛋白；RNase抑制剂；crRNA：gaaattaatacgactcactatagggAAGGCGUCGCUAAAGGCGGCUCUACGAU；ssRNA报告基团：FAMmArArUrGrGrCmAmArArUrGrGrCmABio；所述ssRNA的5’端用FAM标记，3’端用BHQ1标记；阴性对照为双蒸水；阳性对照为副溶血性弧菌基因组DNA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国人民解放军总医院第六医学中心 一种基于RPA-CRISPR/Cas13a-LFD技术的副溶血性弧菌核酸检测试剂盒及检测方法
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