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申请/专利权人：江苏亢钧生物科技有限公司

摘要：本发明提供了一种提高眼镜王蛇抗菌肽OH‑CATH30表达量的诱导方法，用于诱导表达的培养基配方是每1000mL体系中，包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.186g，硫酸钾3.6g，七水硫酸镁2.98g，氢氧化钾0.826g，85%磷酸5.34ml，PTM14ml，氨基酸10g，余量为去离子水，上述氨基酸为组氨酸、苏氨酸与组氨酸组合氨基酸、亮氨酸与组氨酸组合氨基酸或苏氨酸与亮氨酸组合氨基酸。将含有表达质粒的毕赤酵母菌接种至上述培养基中，29℃培养18小时就可进入诱导阶段，诱导阶段29℃培养24h‑48h，然后将菌液离心取上清液，过0.22μm滤膜后得到表达量提高的表达液。本发明的诱导方法能够明显提高表达量，分别为添加组氨酸的培养基提高诱导表达量2.7%左右，添加组氨酸与苏氨酸的氨基酸组合物培养基提高诱导表达量80%左右。

主权项：1.一种提高眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30表达量的诱导方法，其特征在于：所述诱导方法步骤为：S01：制备诱导表达培养基，首先配制YPD基础培养基,配制方法如下：a：称取胰蛋白胨、酵母浸膏，加入纯水溶解，121℃高压灭菌20min；b：称取葡萄糖，加入纯水溶解后定容至一定容量，108℃高压灭菌30min，得到20%（WV）质量浓度葡萄糖溶液；c：在上述a步骤中所配制的溶液中缓慢加入30ml的20%（WV）质量浓度葡萄糖溶液，得到基础培养基YPD；再配制BSM培养基，配制方法如下：①：称取葡萄糖、二水硫酸钙、硫酸钾、七水硫酸镁、氢氧化钾，加入去离子水溶解，加入85%磷酸，定容至一定的体积，121℃高压灭菌20min；②：称取氨基酸，加入①步骤中所配制的溶液中，65℃加热使其溶解，用氨水调整pH到5.0，过0.22μm滤膜，待用；③：配制PTM1溶液，取PTM1加入到步骤②所配制待用的溶液中，得到BSM培养基；所述BSM培养基的每1000mL体系中，培养基组成包括：葡萄糖20g，二水硫酸钙0.186g，硫酸钾3.6g，七水硫酸镁2.98g，氢氧化钾0.826g，85%磷酸5.34ml，PTM14ml，氨基酸10g，余量为去离子水；所述S01步骤中BSM培养基中的氨基酸为苏氨酸与组氨酸组合氨基酸；S02：对携带眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30目的基因的重组毕赤酵母进行表达诱导实验，将携带眼镜王蛇抗菌肽OH-CATH30目的基因接种至S01制得的YPD培养基中制备一级种子液，之后制备二级种子液，29℃培养18h即可进入诱导阶段，诱导阶段将上述二级种子液接种于上述S01步骤中配制的BSM培养基中，诱导阶段添加甲醇和山梨醇，29℃培养24h-48h，然后将菌液离心取上清液，过0.22μm滤膜后得到表达量提高的表达液。

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