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申请/专利权人：生态环境部华南环境科学研究所(生态环境部生态环境应急研究所)

摘要：本发明涉及一种围氏马尾藻种质保存方法，其原理是利用围氏马尾藻受精卵种质在特定条件生长缓慢且不发育，从而达到长期保存的目的。本发明首先对围氏马尾藻生殖托进行阴干处理，加入灭菌海水培养获取受精卵种质，获取受精卵种质后分别依次于不同配方的培养液同培养，然后转移到液氮中超低温保存、需要育苗时取出复活。本发明方法对围氏马尾藻受精卵种质进行离体种质保存，可延长种质保存5个月，解冻后成活率可达60％以上，所获取的种苗形态特征无明显差异。本发明的方法可帮助种苗度过夏季高温期，同时可在短期内获取大量优质种苗，有效避开了高温期种苗生长缓慢、死亡率高的问题，应用前景广泛。

主权项：1.一种围氏马尾藻种质保存方法，其特征在于，包括以下步骤：1）将围氏马尾藻受精卵种质依次放置于不同配方的种质保存培养液中培养；其中，所述围氏马尾藻受精卵种质的获取方法为从成熟的围氏马尾藻藻体选取健康、成熟的生殖托清洗和阴干，并将阴干后的生殖托放置于灭菌海水中培养以获取受精卵种质，其中阴干温度为15~20℃，阴干时间为12~24小时，所述阴干后的生殖托的培养方法为将所述阴干后的生殖托放置于水箱中，添加灭菌海水，环境温度控制在20~25摄氏度，微量充气培养，光照强度为2500lx，促使生殖托排出受精卵；所述种质保存培养液是在灭菌海水中加二甲基亚砜以及葡聚糖、脯氨酸或乙二醇中的一种或几种制备的；2）将培养后的受精卵种质超低温保存；其中，所述超低温保存为-80℃~-196℃超低温保存；3）冻存受精卵种质的复活；其中，所述复活方法具体为将冻存的受精卵种质取出后迅速放置于20~25℃的水浴环境中振荡解冻；所述步骤1）中的种质保存培养液是第一培养液、第二培养液、第三培养液、第四培养液、第五培养液和第六培养液中的一种；其中，所述第一培养液包括体积分数8~10%的二甲基亚砜、体积分数2~3%的乙二醇和体积分数8~10%的葡聚糖；所述第二培养液包括体积分数8~10%的二甲基亚砜、体积分数6~8%的葡聚糖和体积分数2~4%的脯氨酸；所述第三培养液包括体积分数8~10%的二甲基亚砜、体积分数4~6%的葡聚糖和体积分数4%的脯氨酸培养液；所述第四培养液包括体积分数8~10%的二甲基亚砜、体积分数2~4%的葡聚糖和体积分数6%的脯氨酸培养液；所述第五培养液包括体积分数8~10%的二甲基亚砜、体积分数1~2%的葡聚糖和体积分数8%的脯氨酸培养液；所述第六培养液包括体积分数8~10%的二甲基亚砜和体积分数8~10%的脯氨酸；所述步骤1）中的培养方法具体为依次在所述第一培养液和所述第六培养液中各培养3-4小时，或依次在所述第二培养液和第五培养液中各培养3-4小时，或依次在第三培养液和第四培养液中各培养3-4小时，或依次在所述第一培养液、所述第二培养液和所述第三培养液中各培养2-2.5小时或者依次在所述第四培养液、所述第五培养液和所述第六培养液中各培养2-2.5小时，或依次在所述第一培养液、所述第二培养液、所述第三培养液、所述第四培养液、所述第五培养液和所述第六培养液中各培养1-1.5小时。

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