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一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶及制备方法与应用 

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申请/专利权人:大连医科大学

摘要:本发明公开了一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶及制备方法与应用,属于水凝胶技术领域。一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备方法,包括以下步骤:将去细胞化小肠黏膜下层消化后盐析冻干,制成粉末后溶解,并与丝素蛋白溶液混合后超声,即得。所述细胞外基质水凝胶可以作为皮肤损伤修复敷料和生物相容性细胞支架使用。结合丝素蛋白后,伤口愈合速度和皮肤愈合程度均得到明显提升。

主权项:1.一种结合丝素蛋白的猪去细胞化小肠黏膜下层细胞外基质水凝胶的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:1将猪去细胞化小肠黏膜下层粉末用消化液消化,离心,取上清液,调节pH至7-7.5;加盐析出、离心若干次,保留沉淀,冷冻干燥;2取干燥后的沉淀粉末,按50-100mgml加入vv为0.1-0.2%的乙酸溶解,用DMEM调节渗透压至生理水平;3wv为3-6%的丝素蛋白溶液超声,将步骤2所得溶液按体积比1:1加入超声后的丝素蛋白溶液;4将混合后的溶液超声,接种于孔板中,孵育,即得;所述猪去细胞化小肠黏膜下层粉末是由小肠黏膜下层经脱脂,脱细胞,胃蛋白酶消化,多次盐析离心,真空冷冻干燥,粉碎研磨后制得;所述脱脂为小肠黏膜下层在甲醇和氯仿体积比为1:1-1:1.5的溶液中避光静置;所述脱细胞为将脱脂后的猪小肠黏膜下层浸泡于去离子水配制的wv为0.04-0.06%的胰蛋白酶wv为0.04-0.06%的乙二胺四乙酸二钠的溶液中,再于wv为0.4-0.6%的SDS和生理盐水中摇动4-5小时;步骤1所述消化液为胃蛋白酶消化液,所述猪去细胞化小肠黏膜下层粉末与胃蛋白酶消化液的质量比为9:1-11:1,再按9.5-10.5mgml加入vv为2.5%-3.5%的乙酸,48-72h后,猪去细胞化小肠黏膜下层无絮状物,呈半透明状,离心。

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权利要求:

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