申请/专利权人：吴子平

申请日：2024-04-18

公开（公告）日：2024-05-31

公开（公告）号：CN118104566A

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.06.18#实质审查的生效;2024.05.31#公开

摘要：本发明属于植物组培领域，公开了一种蝴蝶兰茎尖脱毒组培快繁的方法，包括如下步骤：①待脱毒蝴蝶兰瓶苗所携带病毒摸底，②脱毒蝴蝶兰瓶苗冷热处理，③茎尖剥离液体振荡培养，④茎尖分化诱导，⑤分生苗病毒检测，⑥继代增殖，⑦不定芽生根。本发明提供的一种蝴蝶兰茎尖脱毒组培快繁的方法，首先对待脱毒材料进行病毒摸底，明确茎尖待脱除与待检测的病毒种，解决了因主观认定待检目标病毒而造成可能的其它病毒漏检的共性问题；采用冷热结合预处理待脱毒材料，热处理加快茎尖分生细胞的生长以扩大茎尖不带毒区域，同时冷热处理，钝化病毒，再以0.2～0.5mm的茎尖结合液体培养，通过娴熟茎尖剥离操作保障茎尖脱毒的效果，通过液体振荡培养及添加CPPU保障茎尖细胞的分裂而保障茎尖的成活率，进而解决目前蝴蝶兰茎尖成活率低、脱毒率不高的共性问题。

主权项：1.一种蝴蝶兰茎尖脱毒组培快繁的方法，包括如下步骤：1）待脱毒蝴蝶兰瓶苗所携带病毒摸底，随机抽取待脱毒蝴蝶兰瓶苗，取其汁液接种于病毒生物指示植物心叶烟、苋色藜、曼陀萝上，30d后取出现病斑的心叶烟、苋色藜、曼陀萝叶提纯病毒，进行电镜检测观察病毒形态判断病毒种，根据初步判定的病毒种进行相应的PCR检测，进一步确认待脱毒蝴蝶兰所携带的病毒种，并将其作为茎尖分生苗是否脱毒的检测依据；2）脱毒蝴蝶兰瓶苗冷热处理，取待脱毒蝴蝶兰瓶苗置于人工气候箱，每天30℃6h12℃6h，1000lux，20d；3茎尖剥离培养，取冷热处理后的蝴蝶兰，在超净工作台上切取10mm带茎尖的茎段，并在连续变倍体显微镜下逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，截取约带1~2个叶原基的生长点（约0.1~0.5mm），截取生长点时采取‘V’型切法，避免生长点沾上非截取部位的汁液，并迅速接入到茎尖液体培养基中，26±1℃，300～500lux，12hd，120r连续振荡培养。剥取茎尖操作时，每剥一层幼叶需更换一套无菌刀、镊；4茎尖分化诱导，茎尖液体振荡培养15～20天，转绿后及时转到茎尖分化诱导培养基上，26±1℃、300～1500lux、12hd培养40～45d。茎尖分化诱导培养基以MS为基础，含有2~5mgL的6-BA、0.01~0.1mgL的NAA、50~100mgL的VC、50~150mgL的CA、5~15%的椰汁、20gL的蔗糖、6~7gL的琼脂，pH5.8。茎尖形成的芽团，芽数可达10～40个，无序分布；5分生芽团病毒检测，取10～15%分生芽团的茎叶汁液接种于病毒生物指标植物心叶烟、苋色藜、曼陀萝上，30d后取接种了分生芽团茎叶汁液的心叶烟、苋色藜、曼陀萝叶及分生芽团茎叶的汁液，进行目标病毒PCR检测与电镜检测，筛选无病毒分生芽团；6继代增殖，指经目标病毒检测，无病毒的分生芽团，切除褐化老组织，按方向性切割，芽高10-25mm、茎￠≥5mm、2片以上展开叶、叶宽≥5mm、2～3芽团接入增殖培养基中，10团杯，26±1℃，300~1500lux培养，光照12hd，培养40～45d，芽团增殖率达到3～4；7不定芽生根，指从增殖芽团中切取具有两片展开叶且叶宽均≥5mm、￠≥5mm的单芽，接种于生根培养基中，15株杯，26±1℃，1500~2500lux培养，光照12hd。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吴子平 一种蝴蝶兰茎尖脱毒组培快繁的方法

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