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猴耳环品种鉴定的SSR多重检测引物、试剂盒及方法 

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申请/专利权人:中国林业科学研究院热带林业研究所

摘要:本发明公开了猴耳环品种鉴定的SSR多重检测引物、试剂盒及方法。与单个标记的独立PCR检测相比,本发明方法具有经济性好、节约试剂和省时高效等优点,为猴耳环和近缘种的群体多样性分析、种质资源遗传评价、品种和药材真实性鉴定等提供了简便可靠的方法;将该方法用于猴耳环品种扦插无性系的SSR分子指纹的构建和待检品种的鉴定,具有准确可靠、有效快捷的优点,可有效甄别假冒和错乱的品种以及新的品种,这为保障良种培育人和营林种植者的权益提供了重要的技术支撑。

主权项:1.一种猴耳环品种鉴定的方法,其特征在于,包括以下步骤:a.提取待鉴定猴耳环植株的DNA;b.以步骤a提取的猴耳环的DNA为模板,利用SSR多重检测引物按组合A、B、C、D、E、F、G分别进行多重PCR扩增,得到PCR产物;c.对PCR产物进行检测和分型,与猴耳环SSR分子指纹进行比对,确定待鉴定猴耳环品种;所述的SSR多重检测引物的组合A、B、C、D、E、F、G分别如下所示:组合A:ARCeSSR266、ARCeSSR141和ARCeSSR277的引物对;组合B:ARCeSSR304和ARCeSSR665的引物对;组合C:ARCeSSR425和ARCeSSR464的引物对;组合D:ARCeSSR095和ARCeSSR006的引物对;组合E:ARCeSSR075和ARCeSSR649的引物对;组合F:ARCeSSR288和ARCeSSR366的引物对;组合G:ARCeSSR474和ARCeSSR448的引物对;所述的ARCeSSR266的引物对的前向引物如SEQIDNO.1所示,后向引物如SEQIDNO.2所示;所述的ARCeSSR141的引物对的前向引物如SEQIDNO.3所示,后向引物如SEQIDNO.4所示;所述的ARCeSSR277的引物对的前向引物如SEQIDNO.5所示,后向引物如SEQIDNO.6所示;所述的ARCeSSR304的引物对的前向引物如SEQIDNO.7所示,后向引物如SEQIDNO.8所示;所述的ARCeSSR665的引物对的前向引物如SEQIDNO.9所示,后向引物如SEQIDNO.10所示;所述的ARCeSSR425的引物对的前向引物如SEQIDNO.11所示,后向引物如SEQIDNO.12所示;所述的ARCeSSR464的引物对的前向引物如SEQIDNO.13所示,后向引物如SEQIDNO.14所示;所述的ARCeSSR095的引物对的前向引物如SEQIDNO.15所示,后向引物如SEQIDNO.16所示;所述的ARCeSSR006的引物对的前向引物如SEQIDNO.17所示,后向引物如SEQIDNO.18所示;所述的ARCeSSR075的引物对的前向引物如SEQIDNO.19所示,后向引物如SEQIDNO.20所示;所述的ARCeSSR649的引物对的前向引物如SEQIDNO.21所示,后向引物如SEQIDNO.22所示;所述的ARCeSSR288的引物对的前向引物如SEQIDNO.23所示,后向引物如SEQIDNO.24所示;所述的ARCeSSR366的引物对的前向引物如SEQIDNO.25所示,后向引物如SEQIDNO.26所示;所述的ARCeSSR474的引物对的前向引物如SEQIDNO.27所示,后向引物如SEQIDNO.28所示;所述的ARCeSSR448的引物对的前向引物如SEQIDNO.29所示,后向引物如SEQIDNO.30所示;所述的步骤b中的多重PCR扩增,体系为10μL,包括1.0μL10×缓冲液,200μM各dNTP,0.084μMSSR多重检测引物的组合A中的各前向后向引物或0.125μMSSR多重检测引物的组合B、C、D、E、F或G中的各前向后向引物,1UTaqDNA聚合酶,10ng模板DNA,余量为去离子水;所述的步骤b中的多重PCR扩增,程序为:94℃4min;35个循环:94℃30s,58℃30s,72℃50s;最后72℃5min。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国林业科学研究院热带林业研究所 猴耳环品种鉴定的SSR多重检测引物、试剂盒及方法

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