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申请/专利权人：南京师范大学
摘要：本发明公开了一种黄颡鱼肝细胞高效分离和原代培养方法；包括以下步骤：无菌解剖并分离黄颡鱼肝脏组织，立即置于组织清洗液中冲洗；将清洗后的肝脏剪碎，加入胶原酶Ⅳ，恒温震荡消化组织块；离心组织消化液，重悬沉淀，过筛，并进一步经分离液离心提纯后，使用含有黄颡鱼血清、胎牛血清、双抗青霉素‑链霉素的DMEM完全培养基重悬沉淀，即获得黄颡鱼原代肝细胞，调整细胞密度后铺瓶培养；本发明黄颡鱼肝细胞高效分离和原代培养方法，操作步骤简单，使用的酶试剂少，分离后肝细胞得率高，经原代培养后，肝细胞生长状态好，生理状态稳定，为后续黄颡鱼肝细胞系的建立和细胞层面科学研究的开展提供了理论和技术支持。
主权项：1.一种黄颡鱼肝细胞高效分离和原代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）解剖黄颡鱼，分离肝脏组织，立即置于组织清洗液中，并使用组织清洗液冲洗肝脏组织；（2）使用无菌剪刀破碎冲洗后的肝脏组织至1-3mm3大小的组织块，向组织块中加入其体积4-5倍的胶原酶IV，在恒温摇床中100rpm振荡消化30-40min，获得组织消化液，所述胶原酶IV的使用浓度为1mgml；（3）离心组织消化液，弃上清，重悬沉淀，吹打混匀后，过100μm的细胞筛网，再通过Percoll分离液进一步提纯肝细胞，经1000rpm离心10min后，收获沉淀，利用含有黄颡鱼血清、胎牛血清、双抗青霉素-链霉素的DMEM完全培养基重悬沉淀，即可获得黄颡鱼原代肝细胞；（4）调整黄颡鱼原代肝细胞密度，28℃恒温培养黄颡鱼原代肝细胞，培养48h后更换原培养瓶中的一半培养基，继续扩大培养。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 南京师范大学 一种黄颡鱼肝细胞高效分离和原代培养方法
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