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申请/专利权人：华中科技大学
摘要：本发明涉及一种高通量无偏见的内源性液‑液相分离蛋白质筛选方法，属于生物大分子液‑液相分离领域。对细胞进行相分离诱导处理后裂解，将裂解液离心后的上清液添加至蔗糖浓度梯度最上层，蔗糖浓度梯度从上至下浓度逐渐增大；然后离心，分别收集不同蔗糖浓度梯度的条带，分别提取各条带中的蛋白质进行质谱分析，处理组相对于对照组表达水平有显著差异的蛋白即为筛选到的液‑液相分离蛋白。
主权项：1.一种高通量的内源性液-液相分离蛋白质筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：1对细胞进行相分离诱导处理后再裂解，作为处理组；将细胞直接裂解作为对照组；将处理组和对照组的裂解液离心后的上清液添加至蔗糖浓度梯度最上层；所述蔗糖浓度梯度从上至下浓度逐渐增大；所述处理组和对照组分别至少设置3个重复；2将步骤1得到的蔗糖浓度梯度进行离心，分别收集不同蔗糖浓度梯度的条带，分别提取各条带中的蛋白质；3将步骤2中得到的各条带中的蛋白质进行质谱分析，将每种蛋白在各处理组中的蛋白表达丰度分别比上在各对照组中的蛋白表达丰度，得到蛋白表达丰度比值，取这些蛋白表达丰度比值的平均值，作为该蛋白的表达差异倍数；在P-value≤0.05情况下进行差异显著性分析，若蛋白的表达差异倍数≥1.5，则该蛋白为表达上调蛋白；若蛋白的表达差异倍数≤0.67，则该蛋白为表达下调蛋白；对于处理组中出现蛋白表达丰度的蛋白，而对照组中没有出现蛋白表达丰度的蛋白，直接判定为表达上调蛋白；对于对照组中出现蛋白表达丰度的蛋白，而处理组中没有出现蛋白表达丰度的蛋白，直接判定为表达下调蛋白；所述表达上调蛋白和表达下调蛋白即为相分离诱导处理后的相分离蛋白。
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百度查询： 华中科技大学 一种高通量无偏见的内源性液-液相分离蛋白质筛选方法
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