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申请/专利权人：茅台学院
申请日：2024-04-16
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN118147268A
主分类号：C12Q1/04
分类号：C12Q1/04;C12Q1/6895;C12R1/845;C12R1/80
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.25#实质审查的生效;2024.06.07#公开
摘要：本方案公开了一种高效降解高粱秸秆真菌的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：1前期准备：准备筛菌材料；2菌株的筛选：取秸秆腐烂样品，加入装有50mL蒸馏水的150mL锥形瓶中，在30℃，180rmin摇床中震荡1d，使样品完全分散，静止放置过夜，吸取上清液1mL加入到装有9mL无菌水的试管中反复吹吸3～5次使其充分混匀；吸取1mL液体按上述操作进行10‑3，10‑4、10‑5、10‑6；在30℃恒温培养箱中培养3～5d；获得纯化菌株，搜集孢子液，与灭菌后且浓度为80％甘油进行1：1混合，使甘油终浓度为40％，在冰箱‑20℃保藏；3形态学鉴定；4DNA提取；5PCR凝胶电泳；6酶活鉴定。本方案中的方法可筛选出更好的真菌菌株。
主权项：1.一种高效降解高粱秸秆真菌的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：1前期准备：准备筛菌材料；2菌株的筛选：取1.5～2.5g秸秆腐烂样品，加入装有50mL蒸馏水的150mL锥形瓶中，在30℃,180rmin摇床中震荡1d，使样品完全分散，静止放置过夜，用无菌枪头吸取上清液1mL加入到装有9mL无菌水的试管中反复吹吸3～5次使其充分混匀；吸取1mL液体按上述操作进行10-3，10-4、10-5、10-6，四个不同稀释度的悬浊液，并涂布于PDA培养基；在30℃恒温培养箱中培养3～5d；待菌群长出后，挑取单菌落进行平板划线分离，直至获得纯化菌株；将纯化好的菌株接种至平板进行扩培，用无菌水冲洗平板，搜集孢子液，与灭菌后且浓度为80％甘油进行1：1混合，使甘油终浓度为40％，在冰箱-20℃保藏；3形态学鉴定：取一块干净的载玻片，滴加1～2滴乳酸酚棉蓝染色液，用透明胶在培养基边缘贴取菌丝，浸于乳酸酚棉蓝染色液中，在光学显微镜下进行观察；4DNA提取：用于DNA提取的菌种于PDA固体培养基上生长至布满平板；刮取培养基表面适量菌丝转入1.5mLEP管，用研磨棒研磨后进行提取。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 茅台学院 一种高效降解高粱秸秆真菌的筛选方法
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