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申请/专利权人：青岛农业大学
申请日：2023-06-20
公开（公告）日：2024-06-07
公开（公告）号：CN116904492B
主分类号：C12N15/74
分类号：C12N15/74;C12N1/21;C12N15/60;C12N15/61;C12P5/02;C12R1/01
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.07#授权;2023.11.07#实质审查的生效;2023.10.20#公开
摘要：本发明公开了一种高产异戊二烯的沼泽红假单胞菌及其构建方法和应用。本发明通过质粒过表达异戊二烯合酶IspS和限速酶异戊烯焦磷酸异构酶IDI，获得工程菌株RPISO8，在此工程菌株的基础上，本发明选择强启动子pckA进行外源基因的表达，构建了高产异戊二烯的沼泽红假单胞菌工程菌株RPISO22，其产异戊二烯的产量可以达到610.58μgL，比野生型菌株的产量提高了6倍，因此，本发明所构建的沼泽红假单胞菌工程菌，具有显著的提高异戊二烯产量的效果，进而具有很好的应用前景。
主权项：1.一种产异戊二烯的沼泽红假单胞菌工程菌的构建方法，其特征在于：具体包括以下步骤：（1）合成IspSib基因至pBBRMCS-5质粒上，获得质粒pBBR-IspSib；所述IspSib基因来自于甘薯，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；（2）合成IDIsc基因至pGH质粒上，获得质粒pGH-IDIsc；所述IDIsc基因来自于酿酒酵母，其核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；（3）以所述质粒pGH-IDIsc为模板，扩增IDIsc基因，将扩增产物与所述重组质粒pBBR-IspSib进行无缝连接，转化至感受态细胞，得到重组质粒pBBR-IspSib-IDIsc；（4）扩增启动子pckA，将扩增产物与所述重组质粒pBBR-IspSib-IDIsc进行无缝连接，转化至感受态细胞，得到重组质粒pBBR-PpckA-IspSib-IDIsc；所述启动子pckA来自于沼泽红假单胞菌，其核苷酸序列如SEQIDNO.5所示；（5）将所述重组质粒pBBR-PpckA-IspSib-IDIsc转化至沼泽红假单胞菌CGA009中，经抗性筛选、测序验证后，得到产异戊二烯的沼泽红假单胞菌工程菌。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 青岛农业大学 一种产异戊二烯的沼泽红假单胞菌及其构建方法和应用
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