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申请/专利权人：广东工业大学
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人GPC3蛋白及其原核表达和纯化方法；本发明提供的方法，主要包括构建pET32a‑GPC3蛋白表达质粒、将pET32a‑GPC3蛋白表达质粒转化、培养表达TrxA‑GPC3蛋白、纯化TrxA‑GPC3蛋白、切除TrxA标签蛋白并通过分子筛得到GPC3蛋白等过程。本发明将能在大肠杆菌中高表达的TrxA标签蛋白与编码人GPC3蛋白的基因进行重组，来提高目的蛋白的表达量和稳定性，然后利用酶切和分子筛纯化出单一的GPC3蛋白的。采用本发明提供的方法，操作方便，成本低，纯化效果好，为免疫学快速诊断、制备单抗等提供物质基础。
主权项：1.一种人GPC3蛋白的原核表达和纯化方法，其特征在于，该方法按照以下步骤：1构建TrxA-GPC3融合蛋白的表达载体，并获得重组质粒pET32a-GPC3；2TrxA-GPC3融合蛋白的原核表达将所述重组质粒pET32a-GPC3转入BL21大肠杆菌，经IPTG诱导表达，获得菌体沉淀；破碎细菌，收集沉淀，然后进行SDS-PAGE电泳分析；3TrxA-GPC3融合蛋白的纯化将沉淀经洗涤后，变性溶解并复性，采用亲和层析法进行纯化的初步纯化的融合蛋白TrxA-GPC3；4TrxA标签的切除与GPC3蛋白的分子筛纯化测定溶液中的TrxA-GPC3蛋白浓度并进行酶切，通过分子筛纯化得到GPC3蛋白。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 广东工业大学 一种人GPC3蛋白及其原核表达和纯化方法
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