申请/专利权人：广东省农业科学院果树研究所

申请日：2024-02-26

公开（公告）日：2024-06-11

公开（公告）号：CN118166023A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/66;A01H5/00;A01H6/78

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.11#公开

摘要：本发明涉及一种简便、高效的柑橘遗传转化终载体及其构建方法和应用，本发明涉及分子生物技术领域，具体来说是以常用的植物遗传转化载体pCAMBIA1300为基础，通过突变载体上的BsaI和BpiI酶切位点，并添加ccdB致死基因筛选标记，不仅适配Goldengate体系，而且便于阳性菌落的筛选，大大缩短载体的构建周期，提高柑橘遗传转化效率。实验结果表明，由pAGM243衍生的载体，构建简单、转化效率高，未来可作为各种Goldengate系列载体的通用型分子骨架。本发明所涉及的载体构建简单、经济便捷、遗传转化效率高、省时省力。本发明能为现有载体的优化升级提供思路，对柑橘的基因功能研究具有重要意义。

主权项：1.一种简便、高效的柑橘遗传转化终载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、合成pAGM243-1F1R，pAGM243-2F2R，pAGM243-3F3R，pAGM243-4F4R四对引物，pAGM243-1F1R序列如SEQIDNO：1和SEQIDNO：2所示，pAGM243-2F2R序列如SEQIDNO：3和SEQIDNO：4所示，pAGM243-3F3R序列如SEQIDNO：5和SEQIDNO：6所示，pAGM243-2F2R序列如SEQIDNO：7和SEQIDNO：8所示，四对引物5’端均含有BsaI酶切位点；步骤2、以pJOG387为模板，pAGM243-1F1R为引物进行扩增，获得ccdB片段，命名为PCR1；以pKGW-GGRR-CPromotorGUS载体为模板，并突变载体骨架上的BsaI和BpiI酶切识别序列，以pAGM243-2F2R，pAGM243-3F3R，pAGM243-4F4R为引物扩增，分别获得三份PCR产物，命名为PCR2、PCR3和PCR4；步骤3、将PCR1、PCR2、PCR3和PCR4产物酶切酶连后，转化DB3.1大肠杆菌感受态细胞，在含有壮观霉素的LB固体培养基中37℃过夜培养，随后挑2-4个菌落，测序成功后提取质粒，命名为pAGM243载体，可作为柑橘遗传转化载体通用型分子骨架，pAGM243载体在左边界和右边界间预留出两个BpiI位点，左边界和右边界间插入有ccdB致死基因。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 广东省农业科学院果树研究所 一种简便、高效的柑橘遗传转化终载体及其构建方法和应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD