申请/专利权人：兰州兽研生物科技有限公司

申请日：2023-02-23

公开（公告）日：2024-06-11

公开（公告）号：CN116359498B

主分类号：G01N33/569

分类号：G01N33/569;G01N33/559

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.11#授权;2023.07.18#实质审查的生效;2023.06.30#公开

摘要：本发明公开了一种口蹄疫、非洲猪瘟、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体联检的免疫层析试纸卡。该试纸卡包括用于检测口蹄疫O型病毒抗体的胶体金免疫试纸条、用于检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条、用于检测猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条、用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的胶体金免疫试纸条和壳体；胶体金免疫试纸条均位于壳体内，每个胶体金免疫试纸条的样品垫部分重叠，其余部分呈辐射状相互分开，壳体设有一个加样孔，对应于每个胶体金免疫试纸条的样品垫重合部分。该试纸卡一次可以同时检测口蹄疫O型、非洲猪瘟、猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征病毒四种病毒病抗体，具有敏感性及特异性高，使用方法简便、易于操作，稳定性好的优点。

主权项：1.一种免疫层析试纸卡，其包括用于检测口蹄疫O型病毒抗体的胶体金免疫试纸条、用于检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条、用于检测猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条、用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的胶体金免疫试纸条和壳体；所述胶体金免疫试纸条均由依次连接并固定于底板上的样品垫、免疫胶体金探针垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成；所述免疫胶体金探针垫上均包被有胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜上均包被有检测线和质控线，且所述检测线和所述质控线相互分离；所述检测线位于所述硝酸纤维素膜靠近所述样品垫的一端；所述质控线位于所述硝酸纤维素膜靠近所述吸水垫的一端；所述胶体金免疫试纸条均位于所述壳体内，每个所述胶体金免疫试纸条的样品垫部分重叠，其余部分呈辐射状相互分开，所述壳体设有一个加样孔，对应于每个胶体金免疫试纸条的样品垫重合部分，所述壳体设有四个观测窗，分别对应于每个胶体金免疫试纸条的检测线部分和质控线部分；所述用于检测口蹄疫O型病毒抗体的胶体金免疫试纸条中的胶体金标记物由胶体金标记的口蹄疫O型病毒抗原146S和胶体金标记的兔抗IgG组成，所述检测线包被有口蹄疫O型病毒抗原146S；其中，所述胶体金标记的口蹄疫O型病毒抗原146S的制备方法如下：用0.02MK2CO3溶液调节胶体金溶液pH值至7.5；然后按1.1μgmL标记量加入口蹄疫O型病毒纯化抗原146S，磁力搅拌40min；再加入100gLBSA至终浓度为10gL，磁力搅拌30min；最后10000rmin离心40min，弃上清，将沉淀用金胶缓冲液悬浮溶解；所述用于检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条中的胶体金标记物由胶体金标记的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白和胶体金标记的兔抗IgG组成，所述检测线包被有非洲猪瘟病毒重组p30蛋白；其中，所述胶体金标记的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白的制备方法如下：用0.02MK2CO3溶液调节胶体金溶液pH值至9.0；然后按2.7μgmL标记量加入非洲猪瘟病毒重组p30蛋白，磁力搅拌40min；再加入100gLBSA至终浓度为10gL，磁力搅拌30min；最后10000rmin离心40min，弃上清，将沉淀用金胶缓冲液悬浮溶解；所述用于检测猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条中的胶体金标记物由胶体金标记的猪瘟病毒重组E2蛋白和胶体金标记的兔抗IgG组成，所述检测线包被有猪瘟病毒重组E2蛋白；其中，所述胶体金标记的猪瘟病毒重组E2蛋白的制备方法如下：用0.02MK2CO3溶液调节胶体金溶液pH值至7.5；然后按34μgmL标记量加入猪瘟病毒重组E2蛋白，磁力搅拌40min；再加入100gLBSA至终浓度为10gL，磁力搅拌30min；最后10000rmin离心40min，弃上清，将沉淀用金胶缓冲液悬浮溶解；所述用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的胶体金免疫试纸条中的胶体金标记物由胶体金标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白和胶体金标记的兔抗IgG组成，所述检测线包被有猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白；其中，所述胶体金标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的制备方法如下：用0.02MK2CO3溶液调节胶体金溶液pH值至7.5；然后按4μgmL标记量加入猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白，磁力搅拌40min；再加入100gLBSA至终浓度为10gL，磁力搅拌30min；最后10000rmin离心40min，弃上清，将沉淀用金胶缓冲液悬浮溶解；所述胶体金标记的兔抗IgG的制备方法如下：用0.02MK2CO3溶液调节胶体金溶液pH值至8.5；然后按4μgmL标记量加入兔抗IgG，磁力搅拌40min；再加入100gLBSA至终浓度为10gL，磁力搅拌30min；最后10000rmin离心40min，弃上清，将沉淀用金胶缓冲液悬浮溶解；所述用于检测口蹄疫O型病毒抗体的胶体金免疫试纸条的胶体金标记物中，所述胶体金标记的口蹄疫O型病毒抗原146S和所述胶体金标记的兔抗IgG的体积比为9:1；所述用于检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条的胶体金标记物中，所述胶体金标记的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白和所述胶体金标记的兔抗IgG的体积比为9:1；所述用于检测猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条的胶体金标记物中，所述胶体金标记的猪瘟病毒重组E2蛋白和所述胶体金标记的兔抗IgG的体积比为9:1；所述用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的胶体金免疫试纸条的胶体金标记物中，所述胶体金标记的猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白和所述胶体金标记的兔抗IgG的体积比为9:1；所述用于检测口蹄疫O型病毒抗体的胶体金免疫试纸条的检测线上的口蹄疫O型病毒抗原146S的包被浓度为0.2mgmL；所述用于检测非洲猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条的检测线上的非洲猪瘟病毒重组p30蛋白的包被浓度为0.1mgmL；所述用于检测猪瘟病毒抗体的胶体金免疫试纸条的检测线上的猪瘟病毒重组E2蛋白的包被浓度为0.57mgmL；所述用于检测猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体的胶体金免疫试纸条的检测线上的猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的包被浓度为0.42mgmL；所述胶体金免疫试纸条的质控线上均包被有羊抗兔IgG；所述羊抗兔IgG的包被浓度均为0.2mgmL。

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