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申请/专利权人：天津科技大学

摘要：本发明提供了一种多巴胺生产菌株及其构建方法与应用，所述菌株缺失了tynA、tyrR、pykF基因，上调了aroGfbr、aroE、tyrAfbr、tyrB、aroP、pdxJ、pdxH基因，异源表达了来源于Corynebacteriumglutamicum的cg0898基因、Serratiarubidaea的hpaBC基因，同时所述生产菌携带了质粒PET‑DA02，所述质粒异源表达了来源于Drosophilamelanogaster的DmDdc基因；所述菌株通过优化辅因子供给系统，为关键酶多巴脱羧酶的表达提供了充足的辅因子，提高多巴胺生产水平，实现了多巴胺的高效生产。

主权项：1.一种多巴胺生产菌株，其特征在于：为多巴胺基因工程菌DA-14，是在E.coliW3110的基础上进行代谢工程改造获得的，缺失了tynA、tyrR、pykF基因，上调了aroGfbr、aroE、tyrAfbr、tyrB、aroP、pdxJ、pdxH基因，异源表达了来源于Corynebacteriumglutamicum的cg0898基因以及Serratiarubidaea的hpaBC基因，同时携带了质粒PET-DA02，所述质粒PET-DA02异源表达了来源于Drosophilamelanogaster的DmDdc基因，具体来说，是以E.coliW3110ATCC27325作为底盘菌株，敲除了菌株基因组上的tynA、tyrR、pykF基因；利用trc启动子强化来源于aroGfbr基因转录，并整合到基因组ygaY基因位点；利用trc启动子强化aroE基因转录强度，并整合到基因组ycgh基因位点；利用trc启动子强化tyrAfbr基因转录强度，并整合到基因组yeeP基因位点；利用trc启动子强化tyrB基因转录强度，并整合到基因组yeeL基因位点；利用trc启动子强化aroP基因转录强度，并整合到基因组yjiP基因位点；利用trc启动子强化pdxJ基因转录强度，并整合到基因组rph基因位点；利用trc启动子强化pdxH基因转录强度，并整合到基因组yciQ基因位点；利用trc启动子强化cg0898基因转录强度，并整合到基因组yjgX基因位点；利用trc启动子强化hpaBC基因转录强度，并整合到基因组ylbE基因位点；利用trc启动子强化hpaBC基因转录强度，并整合到基因组ycdN基因位点；其中，所述trc启动子的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.1所示；tynA基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.3所示；tyrR基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.4所示；pykF基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.5所示；aroGfbr基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.6所示；aroE基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.7所示；tyrAfbr基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.8所示；tyrB基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.9所示；aroP基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.10所示；pdxJ基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.11所示；pdxH基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.12所示；Cg0898基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.13所示；hpaBC基因的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.14所示；质粒PET-DA02的核苷酸序列如序列表SEQIDNO.18所示。

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