申请/专利权人：武汉合生科技有限公司

申请日：2021-11-01

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN114134054B

主分类号：C12N1/15

分类号：C12N1/15;C12N15/54;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/80;C12N15/53;C12N15/31;C12N15/90;C12P5/00;C12P7/62;C12P17/02;C07D303/04;C07C69/16;C07C13/52;A61P29/00;C12R1/69

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2022.06.07#专利申请权的转移;2022.03.22#实质审查的生效;2022.03.04#公开

摘要：本发明公开了一种高产萜类的米曲霉底盘和高通量自动化挖掘萜类生物合成基因簇FgJ02895的方法，是针对萜类产物高产、萜类生物合成基因簇高通量异源重构和活性为导向的化合物筛选。本发明基于CRISPRCas9技术介导基因同源重组，在基因组中基因高表达位点整合型过表达内源MVA途径基因，建立了高产萜类的米曲霉底盘细胞，实现了mangicdiene和mangicolJ产量的41倍和111倍提升。在该底盘中建立的包括PCR扩增、质粒库和菌株库构建的高通量挖掘策略，实现了基因簇FgJ02895相关产物的挖掘，并获得该基因簇的产物库。同时还能对菌株库中产生的化合物进行抗炎活性评估。

主权项：1.一种提高mangicdiene产量的方法，其特征在于，包括对菌株AO-S84或AO-S96进行发酵，所述菌株的出发菌株为米曲霉NSAR1，菌株AO-S84包括3×PhlyA-tHMG1-Tnos、PoliC-MVD1-TagdA、PglaA-IDI-TniaD、PamyB-mgcD-TamyB、PoliC-ERG10-TniaD、PamyB-ERG13-TamyB、PglaA-ERG12-Tnos、PenoA-ERG8-TamyB、PhlyA-tHMG1-TniaD；菌株AO-S96是以米曲霉NSAR1为出发菌株得到pyrG缺陷型的米曲霉NSAR1，在所述pyrG缺陷型的米曲霉NSAR1的HS401位点整合2×PhlyA-tHMG1-Tnos、PoliC-MVD1-TagdA、PamyB-IDI-TniaD，在所述pyrG缺陷型的米曲霉NSAR1的HS201位点整合PoliC-ERG10-TniaD、PamyB-ERG13-TamyB、PhlyA-tHMG1-Tnos，在所述pyrG缺陷型的米曲霉NSAR1的HS601位点整合PglaA-ERG12-Tnos、PenoA-ERG8-TamyB、PhlyA-tHMG1-TniaD，在所述pyrG缺陷型的米曲霉NSAR1的HS801位点整合PhlyA-mgcD-TniaD构建得到的；其中，PglaA的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示；PoliC的核苷酸序列如SEQIDNO：5所示；PamyB的核苷酸序列如SEQIDNO：7所示，PenoA的核苷酸序列如SEQIDNO：8所示，PhlyA的核苷酸序列如SEQIDNO：9所示；ERG10基因的核苷酸序列如SEQIDNO：10所示；ERG13基因的核苷酸序列如SEQIDNO：11所示；tHMG1基因的核苷酸序列如SEQIDNO：12所示；ERG12基因的核苷酸序列如SEQIDNO：13所示；ERG8基因的核苷酸序列如SEQIDNO：14所示；MVD1基因的核苷酸序列如SEQIDNO：15所示；IDI基因的核苷酸序列如SEQIDNO：16所示；扩增片段mgcD的核苷酸序列如SEQIDNO：17所示；TamyB的核苷酸序列如SEQIDNO：19所示，TniaD的核苷酸序列如SEQIDNO：20所示，TagdA的核苷酸序列如SEQIDNO：21所示；Tnos的核苷酸序列如SEQIDNO：22所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 武汉合生科技有限公司 一种高产萜类化合物的米曲霉底盘菌株及萜类天然产物自动化高通量挖掘平台的搭建

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