申请/专利权人：武汉承启医学检验实验室有限公司

申请日：2022-01-19

公开（公告）日：2024-06-18

公开（公告）号：CN114507709B

主分类号：C12Q1/6806

分类号：C12Q1/6806

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.18#授权;2022.06.03#实质审查的生效;2022.05.17#公开

摘要：本申请属于生物试剂技术领域，具体公开一种用于保护血液中游离DNA的保护剂，其特征在于，每100ml所述保护剂包括如下组分：乙二胺四乙酸二钠5‑12g，茶多酚0.8‑1.5g，蛋白酶K2‑8g，枸杞提取物2.5‑4.5g，余量为缓冲液。本申请至少具有以下有益效果之一：本申请提供的保护剂能够用于保护血液中游离DNA，防止游离DNA的降解，也能够防止基因组DNA降解而污染游离的DNA，而且本申请提供的cfDNA保护剂成分简单，来源广泛，不含有害成分，对环境友好，成本低，适用于大规模的工业化生产及推广。

主权项：1.一种用于保护血液中游离DNA的保护剂，其特征在于，每100ml所述保护剂包括如下组分：乙二胺四乙酸二钠8-10g，茶多酚1.0-1.2g，蛋白酶K4-6g，枸杞提取物3-4g，余量为缓冲液；每100ml所述保护剂中还包括甘油2-5mL；所述保护剂的制备方法包括如下步骤：S1：将乙二胺四乙酸二钠，茶多酚和枸杞提取物加入到缓冲液中混合均匀；S2：再将蛋白酶加入到缓冲液中混合均匀，再加入甘油混合均匀；所述缓冲液为0.05mollTris-HCl缓冲液、0.2moll磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液或1×PBS缓冲液中的一种，且所述缓冲液的pH值为7.5；所述枸杞提取物的制备方法如下：1）取新鲜的枸杞果实清洗，破碎后打浆；过筛80目筛，收集果汁；2）将果汁加热至45℃，调节pH值为4.0，然后按照果汁的重量加入0.04%的果胶酶，混合均匀，静置0.5h后，过滤收集滤液；3）按照滤液的重量加入0.5%的活性炭进行搅拌吸附，过滤收集滤液；4）向步骤3）的滤液中加入滤液重量0.05%的木瓜蛋白酶搅拌1h，然后加入滤液重量0.2%的三氯乙酸充分搅拌后，过滤收集滤液；5）在-0.8Mpa，温度为55℃条件下蒸发步骤4）所获得的滤液得到浓缩液；6）向浓缩液中加入浓缩液重量2%的活性炭搅拌0.5h后静置，过滤取滤液；7）向步骤6）中的滤液中加入5倍体积95%的乙醇，搅拌0.5h后静置，过滤收集沉淀物，真空干燥，制得所述枸杞提取物。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 武汉承启医学检验实验室有限公司 一种用于保护血液中游离DNA的保护剂

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