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申请/专利权人：中国科学院大连化学物理研究所
申请日：2020-11-30
公开（公告）日：2024-06-18
公开（公告）号：CN114577557B
主分类号：G01N1/28
分类号：G01N1/28;G01N1/40;G01N33/68
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.18#授权;2022.06.21#实质审查的生效;2022.06.03#公开
摘要：本发明涉及一种基于催化酶激活的新型靶向交联剂，实现化学交联反应在特定亚细胞器中的靶向、可控激活，从而进行亚细胞器靶向的蛋白质复合物原位分析。该方法可在细胞原位水平上，实现在特定亚细胞器中或目标蛋白质区域范围内的的靶向性化学交联反应，从而进行亚细胞器时空分辨的蛋白质相互作用的动态变化精准解析。
主权项：1.一种基于催化酶激活的靶向交联剂在蛋白分析中的应用，其特征在于：所述的靶向交联剂为C3-C20烷基链二端具有活性基团的有机物；一端活性基团为过氧化物酶激活的苯酚基团，另一端活性基团为可控光反应基团的双吖丙啶基团、三氟甲基双吖丙啶基团、苯基三氟甲基双吖丙啶基团中的一种；作为连接臂的C3-C20烷基链上含有可富集基团如生物素、炔基、叠氮基团中的一种或二种以上；1）将靶向交联剂用有机溶剂配成溶液，加入至细胞培养液中，将细胞培养液加入细菌、真菌或细胞中孵育后，加入过氧化氢溶液进行自由基反应激活后加入淬灭溶液，接着光照引发光反应；2）交联反应完成后，用缓冲液清洗细菌、真菌或细胞，收集细菌、真菌或细胞，进行蛋白提取；3）加入分体式富集试剂，使交联蛋白修饰上富集臂；进行蛋白沉淀，去除多余未反应的富集试剂；4）采用pH为1-6.5的酸性缓冲溶液或pH为7.5-14的碱性缓冲溶液配制的溶有表面活性剂和或有机溶剂的溶解液来溶解交联蛋白样品，加入还原剂，高温孵育，同时进行蛋白质样品的变性及还原；5）加入烷基化试剂对变性及还原后的蛋白质样品进行烷基化反应后，向蛋白质样品中加入蛋白酶溶液进行酶解；6）向步骤（5）的酶解产物中加入富集材料；7）使用盐溶液或表面活性剂洗去富集材料上非特异性吸附的肽段；8）使用洗脱溶液将富集材料上键合的肽段释放出来，除盐，冻干并重溶，进行质谱分析和数据检索。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 中国科学院大连化学物理研究所 一种基于催化酶激活的靶向交联剂在蛋白分析中的应用
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