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申请/专利权人：新疆农业科学院经济作物研究所(新疆维吾尔自治区棉花研究所新疆维吾尔自治区甜菜改良中心);新疆农业科学院核技术生物技术研究所(新疆维吾尔自治区生物技术研究中心);新疆农业职业技术学院
申请日：2024-04-22
公开（公告）日：2024-06-21
公开（公告）号：CN118222622A
主分类号：C12N15/84
分类号：C12N15/84;C12N1/20;A01C1/00;C12R1/01
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.06.21#公开
摘要：本发明提供了一种不依赖组织培养的棉花遗传转化方法，该方法包括：转化受体制备，将携带植物表达载体的根癌农杆菌活化，在激活培养基中进行激活培养，将激活培养的根癌农杆菌菌液离心，收集激活培养的根癌农杆菌菌体，重悬于共转化培养基，得到共转化液；将转化受体转移至共转化液中共培养，将转化后的受体种子，根据抗性表型初步筛选转基因阳性植株，进行PCR、Southernblot检测，进行半定量RT‑PCR基因表达和Westernblot蛋白表达分析。本发明以棉花种子作为转化受体，与农杆菌共转化系统共培养而实现基因的转化。本发明无需经过组织培养及分生组织诱导再生过程，可直接获得转基因棉花植株，为棉花生物技术育种、基因功能解析和种质创新提供新的理论和方法。
主权项：1.一种不依赖组织培养的棉花遗传转化方法，其特征在于，该方法为：S1、转化受体制备：将棉花种子表面消毒处理，得到转化受体；S2、将携带植物表达载体的根癌农杆菌活化，得到活化的根癌农杆菌菌液；S3、将S2中得到的活化的根癌农杆菌在激活培养基中进行激活培养，得到激活培养的根癌农杆菌菌液；S4、共转化液制备：将S3得到的激活培养的根癌农杆菌菌液离心，收集激活培养的根癌农杆菌菌体，重悬于共转化培养基，得到共转化液；S5、将S1中得到的转化受体转移至S4中得到的共转化液中共培养48h，得到转化后的受体种子；S6、播种S5中得到的转化后的受体种子，根据抗性表型初步筛选转基因阳性植株；S7、将S6中初步筛选得到的转基因阳性植株进行PCR、Southernblot检测，进行半定量RT-PCR基因表达和Westernblot蛋白表达分析。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 新疆农业科学院经济作物研究所(新疆维吾尔自治区棉花研究所新疆维吾尔自治区甜菜改良中心);新疆农业科学院核技术生物技术研究所(新疆维吾尔自治区生物技术研究中心);新疆农业职业技术学院 一种不依赖组织培养的棉花遗传转化方法
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