申请/专利权人：江苏硕世生物科技股份有限公司;江苏省血吸虫病防治研究所

申请日：2022-11-10

公开（公告）日：2024-06-21

公开（公告）号：CN115820891B

主分类号：C12Q1/6893

分类号：C12Q1/6893;C12N15/11;C12Q1/6844

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.06.21#授权;2023.04.07#实质审查的生效;2023.03.21#公开

摘要：本发明提供一种对7种疟原虫检测并分型的引物探针组合、试剂盒及检测方法，所述7种疟原虫为无性期恶性疟原虫pf‑a、有性期恶性疟原虫pf‑s、间日疟原虫pv、卵形疟原虫poc亚型、卵形疟原虫pow亚型、三日疟原虫pm、诺氏疟原虫pk，所述引物探针组合包括：fp1、rp1、tp1；rp2；tp2、tp3、tp4、tp5、tp6、tp7、tp8；fp2、fp3、fp4、fp5、fp6、fp7；fp8、fp9、rp3、tp9。本发明采用荧光PCR技术结合熔解曲线分析，在PCR高灵敏度、高特异性检测的基础上实现了对疟原虫合种型别的高通量检测，整个过程设计巧妙，操作简单，为临床提供一种更加便捷的检测方法。

主权项：1.一种对7种疟原虫检测并分型的引物探针组合，其特征在于，所述7种疟原虫为无性期恶性疟原虫pf-a、有性期恶性疟原虫pf-s、间日疟原虫pv、卵形疟原虫poc亚型、卵形疟原虫pow亚型、三日疟原虫pm和诺氏疟原虫pk；所述引物探针组合包括：用于检测人体疟原虫的通用引物和探针fp1、rp1、tp1；用于区分人体疟原虫型别的引物rp2；用于区分人体疟原虫型别的探针tp2、tp3、tp4、tp5、tp6、tp7、tp8；用于区分人体疟原虫型别的熔解曲线引物fp2、fp3、fp4、fp5、fp6、fp7、fp8；以及用于监测反应过程的内参基因引物及探针fp9、rp3、tp9；所述fp1的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述rp1的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示；所述tp1的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，所述tp1的5’端标记ROX荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述rp2的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；所述tp2的核苷酸序列如SEQIDNO.5所示，所述tp2的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述tp3的核苷酸序列如SEQIDNO.6所示，所述tp3的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述tp4的核苷酸序列如SEQIDNO.7所示，所述tp4的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述tp5的核苷酸序列如SEQIDNO.8所示，所述tp5的5’端标记VIC荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述tp6的核苷酸序列如SEQIDNO.9所示，所述tp6的5’端标记VIC荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述tp7的核苷酸序列如SEQIDNO.10所示，所述tp7的5’端标记VIC荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述tp8的核苷酸序列如SEQIDNO.11所示，所述tp8的5’端标记VIC荧光基团，3’端标记MGB荧光淬灭基团；所述fp2的核苷酸序列如SEQIDNO.12所示；所述fp3的核苷酸序列如SEQIDNO.13所示；所述fp4的核苷酸序列如SEQIDNO.14所示；所述fp5的核苷酸序列如SEQIDNO.15所示；所述fp6的核苷酸序列如SEQIDNO.16所示；所述fp7的核苷酸序列如SEQIDNO.17所示；所述fp8的核苷酸序列如SEQIDNO.18所示；所述fp9的核苷酸序列如SEQIDNO.19所示所述rp3的核苷酸序列如SEQIDNO.20所示；所述tp9的核苷酸序列如SEQIDNO.21所示，所述tp9的5’端标记CY5荧光基团，3’端标记BHQ3荧光淬灭基团。

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