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申请/专利权人：清华大学
申请日：2023-12-29
公开（公告）日：2024-06-25
公开（公告）号：CN117487896B
主分类号：C12Q1/686
分类号：C12Q1/686;C12Q1/70;C12R1/93
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.06.25#授权;2024.02.23#实质审查的生效;2024.02.02#公开
摘要：本申请涉及生物及环境检测领域，具体涉及一种拮抗剂以及含有其的PCR预混液、PCR检测试剂盒和PCR检测方法。该拮抗剂包括含量比例为（5~60mg）：（10~100mg）：（0.1~1mmol）的反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂。本申请提供合适配方的拮抗剂，在对水体中核酸样品检测的过程中，通过在PCR反应体系中引入该拮抗剂，能够有效缓解提取自水体的核酸样品中各类抑制剂对于实时荧光定量PCR反应的影响，避免抑制条件下定量值偏低的问题，能够提升检测的精密度及灵敏性。
主权项：1.一种目标核酸的PCR检测方法，其特征在于，所述PCR检测方法包括：对待测样本的核酸进行PCR扩增，根据所得扩增结果确定所述待测样本的核酸中含有目标核酸的情况；PCR扩增采用PCR检测试剂盒；所述PCR检测试剂盒包括PCR预混液；PCR预混液包括拮抗剂以及PCR扩增试剂，所述拮抗剂由反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂组成，所述的反转录强化剂、酶保护剂以及金属离子螯合剂在包含所述PCR预混液的PCR反应体系中的浓度分别为5~20mgL、50mgL和0.1mmolL；所述反转录强化剂包括gp32蛋白、E.ColiSSB蛋白和TaqSSB蛋白中的一种或者多种；所述酶保护剂包括牛血清蛋白、牛血清白蛋白组分V和重组白蛋白中的一种或者多种；所述金属离子螯合剂包括乙二胺四乙酸和乙二醇二乙醚二胺四乙酸中的一种或者多种；所述PCR检测试剂盒还包括阳性对照标准品；所述PCR检测试剂盒还包括辅助质控核酸片段以及检测所述辅助质控核酸片段的引物对和探针，所述辅助质控核酸片段不属于待测样本污染物所含的核酸；辅助质控核酸片段如SEQIDNO.13所示；所述PCR检测方法还包括：在所述阳性对照标准品中添加所述辅助质控核酸片段，并采用检测所述辅助质控核酸片段的引物对和探针进行PCR扩增，根据所得扩增结果辅助判断所述待测样本的核酸中含有目标核酸的情况；所述待测样本为水样。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 清华大学 拮抗剂以及含有其的PCR预混液、PCR检测试剂盒和PCR检测方法
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