申请/专利权人：华南理工大学;深圳湾实验室

申请日：2024-01-18

公开（公告）日：2024-06-28

公开（公告）号：CN118257004A

主分类号：C40B30/08

分类号：C40B30/08

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.06.28#公开

摘要：本发明公开了一种DCL‑ABPP的分子库对分子库的筛选方法，包括以下步骤：S1：选取蛋白家族：丝氨酸水解酶、半胱氨酸水解酶、蛋白质组范围内的亲核性氨基酸、半胱氨酸、赖氨酸中的任意一种，待用；S2：分别建立动态反应分子库第一体系、第二体系和第三体系；S3：用广谱丝氨酸水解酶探针FP‑alkyne对第一体系和第二体系中的丝氨酸水解酶进行竞争标记；第三体系无需操作此步骤；S4：提供含生物素标记叠氮化物的点击化学反应试剂，将竞争标记过的丝氨酸水解酶或第三体系中的氨基酸位点与所述点击化学反应试剂混合并进行点击化学反应，然后进行蛋白质组学质谱分析，获得存在抑制剂结构的靶点蛋白信息。

主权项：1.一种DCL-ABPP的分子库对分子库的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：选取蛋白家族：丝氨酸水解酶、半胱氨酸水解酶、蛋白质组范围内的亲核性氨基酸、半胱氨酸、赖氨酸中的任意一种，待用；S2：1建立动态反应分子库第一体系，选取酰腙可逆反应靶向蛋白酶家族，将特异性靶向丝氨酸水解酶的酰肼弹头基团和十种醛基配体混入同一个EP管中，加入40mMpH＝6.2的乙酸铵溶液,将分子库浓度调至1mM，根据分子库数目的不同设置X10组，X为分子库总数目，再加入至细胞裂解液中，添加终浓度10mM苯胺催化反应，获得第一体系；2建立动态反应分子库第二体系，选取亚胺反应靶向蛋白酶家族，将特异性靶向丝氨酸水解酶的亚胺弹头基团和十种醛基配体混入同一个EP管中，加入40mMpH＝6.2的4XPBS溶液,将分子库浓度调至1mM，根据分子库数目的不同设置X10组，X为分子库总数目，再加入至细胞裂解液中无需催化剂，获得第二体系；3建立动态反应分子库第三体系，选取酰腙可逆反应靶向半胱氨酸残基位点，将特异性靶向所有蛋白中半胱氨酸残基位点的酰肼弹头基团和含末端炔基的醛基配体混入同一个EP管中，加入40mMpH＝6.2的乙酸铵溶液,将分子库浓度调至1mM，根据分子库数目不同设置X5组，X为分子库总数目，再加入至细胞裂解液中，添加终浓度10mM苯胺催化反应，获得第三体系；S3：用广谱丝氨酸水解酶探针FP-alkyne对第一体系和第二体系中的丝氨酸水解酶进行竞争标记；第三体系本身带有炔基接头，无需竞争，无需操作此步骤；S4：提供含生物素标记叠氮化物的点击化学反应试剂，将竞争标记过的丝氨酸水解酶或第三体系中的氨基酸位点与光裂解的点击化学反应试剂混合并进行点击化学反应，然后进行蛋白质组学分析，获得存在抑制剂结构的靶点蛋白信息。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华南理工大学;深圳湾实验室 一种DCL-ABPP的分子库对分子库的筛选方法

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