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申请/专利权人：安徽德莱康生物医疗科技有限公司;安徽大学
摘要：本发明公开了基于RPA‑Cas12a和TdT酶的电化学生物传感器及金黄色葡萄球菌检测方法，构建方法为：对电极表面清理和活化；将含有链霉亲和素、胶体金的混合溶液和壳聚糖溶液分别加入玻碳电极的表面；再用BSA封闭液封闭非特异性活性位点；之后，加入生物素修饰探针P，将生物素修饰探针P结合在玻碳电极表面，然后，用超纯水对玻碳电极表面反复进行冲洗，氮气干燥，完成电极表面修饰；然后，加入Cas12a反应体系来切割探针P；然后，加入TdT反应体系进行反应；将球形核酸加入玻碳电极表面，继续孵育。本发明可消除RPA引物干扰，显示出优异的灵敏度和特异性，可用于蔬菜和人血清样品的分析，回收率高。
主权项：1.基于RPA-Cas12a和TdT酶的电化学生物传感器，其特征在于，其构建方法为：将玻碳电极作为工作电极，进行电极表面清理和活化；将含有链霉亲和素、胶体金的混合溶液和壳聚糖溶液分别加入玻碳电极的表面，置于37℃下孵育；再用BSA封闭液在37℃下封闭非特异性活性位点，然后，用超纯水对玻碳电极表面进行反复冲洗，氮气干燥；之后，加入生物素修饰探针P，通过生物素和链霉亲和素的特异性结合，将生物素修饰探针P结合在玻碳电极表面，然后，用超纯水对玻碳电极表面反复进行冲洗，氮气干燥，完成电极表面修饰；然后，加入Cas12a反应体系来切割探针P，Cas12a反应体系包括反应缓冲液、Cas12a蛋白、crRNA、RPA产物和焦碳酸二乙酯处理水，在37℃下孵育后，将电极洗涤并干燥，其中，RPA产物由靶细菌经过DNA提取、RPA反应体系制备形成；然后，加入TdT反应体系，TdT体系包括TdT酶、TdT缓冲液、脱氧鸟嘌呤三磷酸和脱氧腺嘌呤三磷酸，在37℃下的电极上进行反应；将球形核酸加入玻碳电极表面，继续孵育，最后，在玻碳电极表面滴入氯化血红素溶液，37℃下孵育，即为用于检测靶细菌的电化学生物传感器。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 安徽德莱康生物医疗科技有限公司 安徽大学 基于RPA-Cas12a和TdT酶的电化学生物传感器及金黄色葡萄球菌检测方法
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