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申请/专利权人：丽山健康(山东)集团有限公司;山东丽山生物科技有限公司

摘要：本发明涉及细胞培养技术领域，具体提供了一种NK细胞制备方法为以下步骤：步骤一：将外周血混合抗凝剂后离心，弃上层血浆得剩余血样，再加所述剩余血样等质量的生理盐水并混匀得稀释血样，加至淋巴分离液离心管中，离心后将白膜层吸取至新离心管中，补加生理盐水，离心后弃上清，补加生理盐水重悬，之后离心后弃上清得外周血单个核细胞；步骤二：将所述外周血单个核细胞取样计数后用培养液稀释，给予红外辐射并培养4d后取样计数，再添加所述培养液稀释给予红外辐射并3d后取样计数。本发明创造性的结合了红外‑中药体系来促进NK细胞的增殖，本发明特定的红外辐射和中药配比是配合本发明整体方案来起作用的。

主权项：1.一种NK细胞制备方法，其特征在于，所述NK细胞制备方法为以下步骤：步骤一：单个核细胞分离：将50mL外周血混合5mL抗凝剂后移至离心管进行900g离心8min，弃上层血浆得剩余血样，再加所述剩余血样等质量的生理盐水并混匀得稀释血样，吸取所述稀释血样在距液面1cm处沿管壁缓慢加至只含所述剩余血样等质量的淋巴分离液的离心管中，800g离心17min后将离心所得白膜层吸取至新离心管中，补加生理盐水至50mL，800g离心10min后弃上清，补加生理盐水重悬至50mL，之后300g离心10min后弃上清得外周血单个核细胞；步骤二：细胞种瓶扩增：将所述外周血单个核细胞取样计数后用培养液稀释至（0.3~3）×106mL，给予3.2μm波长的红外辐射并放入37℃且5％CO2的培养箱培养4d后取样计数，再添加所述培养液稀释至（0.3~3）×106mL给予3.2μm波长的红外辐射并放入37℃且5％CO2的培养箱培养3d后取样计数；所述培养液由以下组分组成：重量份数为14~18%的中药提取物、重量份数为1%的细胞因子IL15和补足余量的无血清培养液；所述中药提取物的制备方法如下：取质量份数为8~12%的旱莲草、质量份数为10~14%的生地、质量份数为22~28%的灵芝、质量份数为6~9%的黄芪、质量份数为5~7%的女贞子和补足余量的质量浓度为85%的乙醇水溶液，放入闪式提取器，转速6000rmin提取30s后100目滤网过滤，得粗滤提取液；将所述粗滤提取液于78℃且真空度800mbar减压蒸馏至无液体连续流出，收集剩余液得所述中药提取物。

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