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申请/专利权人：内蒙古嘉致农业科技有限公司

摘要：本发明公开了一种蛹虫草菌种种性的鉴别方法，包括蛹虫草菌种种性的鉴别方法，步骤如下：步骤一：取适量河沙土，先加入10％盐酸水进行浸泡，加热煮沸30分钟；本发明通过设计的葡萄糖、琼脂、硫酸镁、磷酸二氢钾、维生素B、虾米粉、鱼粉以及小麦煮汁制备营养平板培养基，本发明的虾米粉以及鱼粉均含有大量的维生素以及矿物质，使用于蛹虫草菌种培养用培养基含有营养成分丰富全面，有效避免培养基中所含营养成分不足，造成正常蛹虫草子囊孢子在培养成菌株菌丝时出现变异退化，对蛹虫草菌种的种性鉴别存在误差，同时鱼粉和虾米粉中含有促生长因子，可刺激蛹虫草子囊孢子和菌株菌丝生长发育速度加快，提高蛹虫草种性鉴别效率。

主权项：1.一种蛹虫草菌种种性的鉴别方法，其特征在于：包括蛹虫草菌种种性的鉴别方法，步骤如下：步骤一：取适量河沙土，先加入10％盐酸水进行浸泡，加热煮沸30分钟；步骤二：将浸泡后的河沙土倒去酸水，用自来水冲洗至中性，并将河沙土置于烘干装置内干燥加工；步骤三：对步骤二烘干后的河沙土进行过滤处理；步骤四：将过滤后的河沙土装入试管内于121℃灭菌1小时后保存，制得沙土管；步骤五：取葡萄糖、琼脂、硫酸镁、磷酸二氢钾、维生素B、虾米粉、鱼粉加入到混合装置内进行搅拌加工，制得营养原料；步骤六：取小麦加入到煮锅内，并加热煮汁40分钟；步骤七：将小麦煮汁采用纱布过滤，并将过滤后的液体取出装入到试管内；步骤八：将步骤五制得的营养原料加入到步骤七装有小麦煮汁的试管内，同时加入蒸馏水进行搅拌混匀，将混合后的液体装入试管内并放入低温环境内进行冷却成型，制得营养平板培养基；步骤九：筛选生产中表现较好的成熟蛹虫草子实体，将子实体于超净工作台中悬挂于装有沙土的沙土管内部，使子囊孢子弹射入灭菌沙土，待子囊孢子弹射如沙土后，用火焰熔封管口，放室内干燥处保存；步骤十：取沙土管保存的子囊孢子，按照梯度稀释的方法，将子囊孢子浓度稀释至1*104个mL，取100uL涂布于步骤八制得的营养平板培养基上，放置于20℃培养；步骤十一：将步骤十获得的菌株菌丝块接种于营养平板培养基上，在距离菌丝块2cm处插入灭菌后的盖玻片，20℃避光培养，待菌丝生长覆盖玻片12时，取出进行显微结构观察；步骤十二：采用DCFH-DA活性氧检测探针法进行活性氧染色观察，将探针与PBS缓冲液以1：1000的比例稀释，-20℃避光保存备用，将附着菌丝的盖玻片浸没于染色液中室温染色30min，置于荧光显微镜下观察。

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