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高效引入赖氨酸衍生物的氨酰基—tRNA合成酶 

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申请/专利权人:苏州鲲鹏生物技术有限公司

摘要:本发明提供了一种突变型赖氨酰‑tRNA合成酶,其在对应于野生型氨酰基‑tRNA合成酶的氨基酸序列的选自下组的一个或多个位点发生缺失:第102位、第128‑140位和第159‑179位氨基酸残基。相比野生型赖氨酰‑tRNA合成酶,本发明突变型赖氨酰‑tRNA合成酶活性高,表达量高,可溶性好,可显著提高非天然氨基酸插入量和含有非天然氨基酸的目的蛋白的表达量。

主权项:1.一种氨酰基-tRNA合成酶的突变蛋白,其特征在于,所述突变蛋白为在SEQIDNO:2所示的野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的基础上进行以下突变所获得的突变蛋白:1在对应于野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的第102位、第128-140位和第159-179位氨基酸残基发生缺失突变;或2将野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的第1-184位替换为SEQIDNO:4的第1-149位,并且将野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的第384位酪氨酸突变为苯丙氨酸;或3将野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的第1-184位替换为SEQIDNO:4的第1-149位,并且将野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的第384位酪氨酸突变为苯丙氨酸;在此基础上,进一步进行以下突变:H29Y、D76G、S89G、N91T、R96K、S121P、N129D、S145P和A148T突变;或4将野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的第1-184位替换为SEQIDNO:4的第1-149位,并且将野生型氨酰基-tRNA合成酶的氨基酸序列的第384位酪氨酸突变为苯丙氨酸;在此基础上,进一步进行以下突变:L274A、C313S和F349Y突变;并且所述的突变蛋白除所述缺失和突变外,其余氨基酸与SEQIDNO:2所示的序列相同。

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