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申请/专利权人：西北工业大学
摘要：本发明提供了一种Apt‑Di9AC‑rMGO外泌体捕获免疫磁珠的制备方法及利用其提取外泌体的方法，解决解决目前磁珠免疫法提取分离外泌体存在效率低、不利于下游实验、抗体成本高，难以洗脱的问题。本发明将氨基化磁性氧化石墨烯和氨基化适配体均通过EDCNHS反应与9AC进行结合，之后通过二聚反应，成功构建了Apt‑Di9AC‑rMGO外泌体捕获免疫磁珠。该免疫磁珠通过其上适配体Apt与外泌体特有的表面CD63蛋白进行碱基互补配对，顺利捕获外泌体；如此不仅能够获得形态完整、纯度高的外泌体，还可通过9AC和Di9AC间单体和二聚体结构能够在不同波长光照下转换的原理，对外泌体进行高效洗脱分离；整个提取过程不影响外泌体的生物活性，有利于外泌体的下游应用。
主权项：1.一种外泌体捕获免疫磁珠Apt-Di9AC-rMGO的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1制备氨基化磁珠将磁性氧化石墨烯和聚赖氨酸盐混合加入甲醇中并分散均匀，加热并搅拌进行反应，反应结束后磁吸洗涤，得到氨基化磁珠；2制备外泌体捕获免疫磁珠2.1将9-蒽羧酸9AC溶于水中，加入1-乙基-3-二甲基氨基丙基碳酰二亚胺EDC反应活化羧基；2.2向氨基化靶向外泌体CD63蛋白的适配体以及步骤1得到的氨基化磁珠中分别加入步骤2.1得到的溶液，之后再分别加入N-羟基丁二酰亚胺NHS，在常温下进行酰胺化反应，反应结束后，均进行分离冻干，得到两种粉末；2.3将步骤2.2得到的两种粉末溶解于脱气的四氢呋喃中，置于黑暗环境中，采用不低于350nm的紫外光照射90-120h后，收集沉淀，磁吸洗涤，真空干燥后得到外泌体捕获免疫磁珠Apt-Di9AC-rMGO。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 西北工业大学 一种Apt-Di9AC-rMGO外泌体捕获免疫磁珠的制备方法及利用其提取外泌体的方法
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