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申请/专利权人:清华大学
摘要:本发明提出了对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用。该方法包括:1选择S期以前的动物受精卵进行透明带弱化处理;2将外源物质与经过透明带弱化处理的动物受精卵混合后,进行电穿孔转染处理,其中,所述外源物质包括Cas9蛋白和sgRNA。利用该方法能有效实现对动物胚胎进行电转染并基因编辑。
主权项:1.一种对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法,其特征在于,包括:1选择S期以前的动物受精卵进行透明带弱化处理,所述动物受精卵处于G1期,所述透明带弱化处理是通过使所述动物受精卵细胞与台式液接触4~40秒钟进行的;2将外源物质与经过透明带弱化处理的动物受精卵混合后,进行电穿孔转染处理,在受精后10小时内,完成所述电穿孔转染处理,所述电穿孔转染处理采用5~10次脉冲;其中,所述外源物质包括Cas9蛋白、至少一种sgRNA和至少一种与所述sgRNA对应的ssODN;基于重量,所述Cas9蛋白与所述至少一种sgRNA重量的比例为2~6:1。
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权利要求:
百度查询: 清华大学 对动物受精卵进行电转染基因编辑的方法及其应用
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