买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：上海爱萨尔生物科技有限公司

摘要：本发明的一种基于多能干细胞分化制备角质细胞的培养方法，将诱导多能干细胞放置于第一阶段培养液进行分化得到初级角质细胞，将初级角质细胞放置于第二阶段培养液进行分化得到成熟角质细胞，第一阶段培养液包括：L‑Glutamine、β‑巯基乙醇、SU6656、Retinoicacid、CHIR99021、hEGF和NKH477；第二阶段培养液包括：L‑Glutamine、β‑巯基乙醇、BMP4和抗坏血酸。本发明的培养方法可以在较短时间内获得由诱导多能干细胞来源的成熟内皮细胞，此方法获得的初级角质细胞和成熟角质细胞纯度好、活率高、功能完善，具有潜在的临床应用价值。

主权项：1.一种用于多能干细胞分化制备角质细胞的添加剂，其特征在于：添加剂分为添加剂A和添加剂B；所述添加剂A用于添加至第一阶段培养液中，并诱导多能干细胞进行分化得到初级角质细胞；所述添加剂B用于添加至第二阶段培养液中，将初级角质细胞进行分化得到成熟角质细胞；所述第一阶段培养液和所述第二阶段培养液均采用DMEMF12基础培养液，且所述第一阶段培养液和第二阶段培养液中DMEMF12基础培养液的体积比为1:0.9~1.3；所述添加剂A为KOSR、非必须氨基酸NEAA、L-Glutamine、β-巯基乙醇、SU6656、视黄酸Retinoicacid、CHIR99021、hEGF和NKH477；其中，SU6656的浓度为3-10μM、视黄酸Retinoicacid浓度为0.5-2μM、CHIR99021浓度为5-20mM、hEGF浓度为8-16ngmL、NKH477浓度为0.05-0.2mM；所述添加剂B为KOSR、非必须氨基酸NEAA、L-Glutamine、β-巯基乙醇、BMP4和抗坏血酸；其中，BMP4浓度为0.05-0.8nM、抗坏血酸浓度为0.05-2μM；所述添加剂A添加至所述第一阶段培养液中的KOSR的浓度为15%-30%，非必须氨基酸NEAA的浓度为1%，L-Glutamine的浓度为0.5-1mM以及β-巯基乙醇的浓度为0.05-1.20mM；所述添加剂B添加至所述第二阶段培养液中的KOSR的浓度为15%-30%，非必须氨基酸NEAA的浓度为1%，L-Glutamine的浓度为0.5-1mM以及β-巯基乙醇的浓度为0.05-1.20mM。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 上海爱萨尔生物科技有限公司 一种基于多能干细胞分化制备角质细胞的培养方法