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申请/专利权人：广州市名卉景观科技发展有限公司;广州建筑股份有限公司;广州市建筑集团有限公司

摘要：本发明提供了一种小茴紫朵丽蝶的组织培养快速繁殖方法，包括外植体的制备与消毒→启动培养→不定芽诱导培养→不定芽的增殖培养→生根培养→组培苗移栽。本发明首次采用组织培养的方法对小茴紫朵丽蝶进行繁殖，该方法繁殖更快，可达到规模化生产的要求，保证了种苗的品质和质量，为小茴紫朵丽蝶繁殖提供了新的有效途径。本发明在诱导培养步骤中通过诱导原球体，用原球体进行增殖长出多芽体，增殖系数2.0‑3.0，与一般分株繁殖方法相比，大大提高了繁体系数。本发明在不定芽诱导培养、不定芽的增殖培养步骤中，培养环境为温度25‑28℃，光照时长8‑11小时，光照强度2000‑3000lux。

主权项：1.一种小茴紫朵丽蝶的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）外植体的制备与消毒：挑选生长健壮、无病虫害长势良好的3.5寸小茴紫朵丽蝶苗，待抽花梗并生长至13cm时取做外植体，用75%酒精擦拭花梗，将花梗切成3cm带节芽的节段，把节芽苞片切除备用；1wt%的双氧水中加2滴吐温，置于摇床上振荡2个小时后，用无菌水洗涤2次，用75%酒精漂洗1分钟，无菌水漂洗2次，将芽段按大中小分组进行消毒；用0.2wt%二氧化氯水溶液在摇床上进行消毒灭菌，大、中、小芽段的二氧化氯水溶液消毒时间分别为25min、17min、12min，节段消毒灭菌结束后用无菌水漂洗3遍待转入培养基；（2）启动培养：取步骤1中消毒好的节段，切去两端0.5cm，将节芽朝上插入启动培养基中进行培养，培养环境温度28℃，光照时长9小时，光照强度2500lux；培养70天，节芽生长成有3片叶片的小苗后转接到增殖培养基；（3）诱导培养：从步骤2中培养的花梗上切离小苗，将小苗的茎段横切成0.5cm的片段，平放在诱导培养基上，培养环境温度27℃，光照时长9小时，光照强度2500lux，培养55天，在茎段切片上可长出原球体；（4）增殖培养：从步骤3中的组织片段上切离原球体，接种到增殖培养基上进行增殖扩繁，培养环境温度27℃，光照时长9小时，光照强度2500lux，培养55天，可获得多量的原球体或从原球体上获得多量的不定芽；（5）壮苗生根培养：从步骤4获得的不定芽组织上切离小苗，接种到壮苗生根培养基上，培养环境温度28℃，光照时长11小时，光照强度3500lux，培养55天，小苗生长到3片叶，再次接种到壮苗生根培养基，培养环境温度27℃，光照时长11小时，光照强度3500lux，培养55天，小苗生长到4片叶，长出2cm的根后可出瓶定植；（6）组培苗移栽：将步骤4中的小苗从培养瓶中取出，用干净的水将培养基洗掉，转移至水帘大棚，用5.5cm透明软杯种植，用40cm60cm45孔穴盆固定摆放；栽培后将小苗叶片按穴盆对角线平行摆放；定植7天后淋一次4000倍克土菌，种植环境湿度85%，温度27℃，种植的基质为水草；等长出根系后，开始淋肥水；启动培养基的组分为：NH4NO3550mgL、KNO3633.3mgL、MgSO4·7H2O123.3mgL、KH2PO456.6mgL、CaCl2·2H2O146.6mgL、KI0.83mgL、H3BO36.2mgL、MnSO4·4H2O22.3mgL、ZnSO4·7H2O8.6mgL、Na2MoO2·2H2O0.25mgL、CuSO4·5H2O0.025mgL、CoCl2·6H2O0.025mgL、FeSO4·7H2O27.8mgL、Na2·EDTA37.3mgL、盐酸硫胺素0.1mgL、烟酸0.5mgL、盐酸吡哆醇0.5mgL、甘氨酸2mgL、肌醇100mgL、椰子水200mlL、白糖17gL、琼脂6.2gL、6-苄氨基嘌呤4mgL和萘乙酸0.4mgL，培养基灭菌前pH调节至5.1；诱导培养基的组分为：NH4NO3550mgL、KNO3633.3mgL、MgSO4·7H2O123.3mgL、KH2PO456.6mgL、CaCl2·2H2O146.6mgL、KI0.83mgL、H3BO36.2mgL、MnSO4·4H2O22.3mgL、ZnSO4·7H2O8.6mgL、Na2MoO2·2H2O0.25mgL、CuSO4·5H2O0.025mgL、CoCl2·6H2O0.025mgL、FeSO4·7H2O27.8mgL、Na2·EDTA37.3mgL、盐酸硫胺素0.1mgL、烟酸0.5mgL、盐酸吡哆醇0.5mgL、甘氨酸2mgL、肌醇100mgL、椰子水200mlL、白糖17gL、琼脂6.2gL、6-氨基嘌呤10mgL、6-苄氨基嘌呤10mgL和萘乙酸1mgL，培养基灭菌前pH调节至5.1；增殖培养基的组分为：NH4NO3550mgL、KNO3633.3mgL、MgSO4·7H2O123.3mgL、KH2PO456.6mgL、CaCl2·2H2O146.6mgL、KI0.83mgL、H3BO36.2mgL、MnSO4·4H2O22.3mgL、ZnSO4·7H2O8.6mgL、Na2MoO2·2H2O0.25mgL、CuSO4·5H2O0.025mgL、CoCl2·6H2O0.025mgL、FeSO4·7H2O27.8mgL、Na2·EDTA37.3mgL、盐酸硫胺素0.1mgL、烟酸0.5mgL、盐酸吡哆醇0.5mgL、甘氨酸2mgL、肌醇100mgL、椰子水200mlL、白糖17gL、琼脂6.2gL、6-氨基嘌呤10mgL、6-苄氨基嘌呤10mgL和萘乙酸1mgL，培养基灭菌前pH调节至5.1；生根培养基的组分为：花宝1号1.5gL、硝酸钙100mgL、甘氨酸1mgL、肌醇50mgL、香蕉泥40gL、土豆泥40gL、白糖25gL、活性炭1gL、紫罗兰茎叶匀浆5gL、无花果提取物9mgL、琼脂6.5gL，培养基灭菌前pH调节至5.1；所述紫罗兰茎叶匀浆的制备方法为：（1）将紫罗兰茎叶洗净后放置在平面容器内，在平面容器内铺设一层塑料薄膜，在塑料薄膜上铺设一层紫罗兰茎叶，间距在2cm，然后将所述平面容器放入-50℃的急冻冷库中急冻；（2）将急冻后的紫罗兰茎叶取出放入超微粉碎机进行粉碎；（3）将粉碎后的紫罗兰茎叶取出，加入其3倍质量的蒸馏水混合，得到紫罗兰茎叶匀浆；急冻时间为50min；所述无花果提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）将无花果干燥后粉碎至80目，得到无花果粉体，将质量比1:5的无花果粉体和水混合后进行超声，得到超声处理液；（2）将所述超声处理液温度75℃浸提2h，取上清液；进行浓缩处理，得到浸膏；（3）将所述浸膏使用乙醇进行醇沉后进行离心，得到无花果提取物；超声时间为40min；所述步骤（5）中种植的基质为：进口智利水草。

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