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申请/专利权人：齐鲁工业大学

摘要：本发明涉及具有抗氧化、抗衰老活性的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽及应用，属于活性肽蛋白技术领域。所述活性肽选自SEQIDNO.1、SEQIDNO.2或SEQIDNO.3；所述SEQIDNO.1、SEQIDNO.2和SEQIDNO.3的氨基酸序列分别为：Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑PheFPPWF、Phe‑Pro‑Pro‑Trp‑Val‑LeuFPPWVL和Gly‑TrpGW。本发明的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽经体内、外实验验证具有抗氧化、抗衰老活性，且安全、无毒性和无副作用，可以作为功能成分用于食品、保健品、化妆品以及抗氧化、抗衰老药品中，具有良好的潜力和应用前景。

主权项：1.具有抗氧化、抗衰老活性的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法的步骤如下：S1：钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的提取（1）将钝顶螺旋藻粉按1:10-20的比例（wv）分散到蒸馏水中，浸泡6-12小时，-20℃冷冻12~24h，然后用流水或37℃水浴融化，反复3次；6000rpm离心15min，取上清液，即为蛋白粗提液；（2）在蛋白粗提液中加入研磨的硫酸铵粉末，使其饱和度为60%；边加边搅拌，至硫酸铵完全溶解后继续搅拌2小时；然后置冰箱冷藏室，静置6-12小时；10000rpm离心15min，取沉淀；沉淀用适量的PBS重溶，将重悬液用透析袋透析，透析过程中更换PBS3次；透析液用6000rpm离心15min，取上清液；上清液即为钝顶螺旋藻藻蓝蛋白粗提液；所述PBS的pH为6.5；（3）吸取适量上述藻蓝蛋白粗提液，加到PBS平衡的DEAESepharoseFastFlow层析柱中，阴离子交换层析法纯化藻蓝蛋白；先用PBS冲洗层析柱，去除杂质和多余的样品，再用含0.3MNaCl的PBS溶液直接洗脱，收集蓝色洗脱液；用透析袋透析，透析过程中更换超纯水3次；透析液用6000rpm离心15min，取上清液，即为纯化的钝顶螺旋藻藻蓝蛋白溶液；所述PBS的pH为6.5；S2钝顶螺旋藻藻蓝蛋白的酶解及其超滤组分制备（1）调节钝顶螺旋藻藻蓝蛋白溶液的pH为10.5，然后加入3000Ug的碱性蛋白酶，混匀后置于摇床中振荡酶解，摇床转速为100-200rpm，酶解时间200-300min，酶解温度40℃；（2）酶解结束，酶解液沸水浴10min，灭活残留的酶；（3）4℃条件下10000-12000rpm离心15min，收集上清液，弃沉淀；上清液即为钝顶螺旋藻藻蓝蛋白肽溶液；（4）使用截留分子量为3kDa的超滤离心管，6000rpm离心30min，吸取超滤管中截留的溶液，即为分子量＜3kDa的超滤组分；（5）收集分子量＜3kDa的超滤组分，冷冻真空干燥制备钝顶螺旋藻藻蓝蛋白肽冻干粉；所述钝顶螺旋藻藻蓝蛋白活性肽由Phe-Pro-Pro-Trp-Phe、Phe-Pro-Pro-Trp-Val-Leu和Gly-Trp组成。

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