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一种哺乳动物细胞基因组整合的高丰度DNA编码文库构建方法及其应用 

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申请/专利权人:天津市肿瘤医院(天津医科大学肿瘤医院)

摘要:本发明公开了一种哺乳动物细胞基因组整合的高丰度DNA编码文库构建方法,所述DNA编码文库为包含文库随机序列的基因表达模块,其特征在于,通过PCR反应构建含有随机序列和表达模块的文库dsDNA片段;通过Gibsonassembly反应将构建的文库dsDNA片段组装在一起形成包含文库随机序列的完整表达模块dsDNA,最后通过PCR反应大规模扩增文库全长dsDNA,获得Gibson‑assembly‑PCRDNA文库;利用CRISPRCas9系统介导Gibson‑assembly‑PCRDNA文库整合入哺乳动物细胞基因组。本发明具有技术简单、综合成本低及可靠性高等优势,这对高通量的认识序列变异与疾病表型之间的相关性、开发新型药物、解析人体生理病理过程等具有重大意义。

主权项:1.一种哺乳动物细胞基因组整合的高丰度DNA编码文库构建方法,所述DNA编码文库为包含文库随机序列的基因表达模块,其特征在于,通过PCR反应构建含有随机序列和表达模块的文库dsDNA片段;通过Gibsonassembly反应将构建的文库dsDNA片段组装在一起形成包含文库随机序列的完整表达模块dsDNA,最后通过PCR反应大规模扩增文库全长dsDNA,获得Gibson-assembly-PCRDNA文库;利用CRISPRCas9系统介导Gibson-assembly-PCRDNA文库整合入哺乳动物细胞基因组。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 天津市肿瘤医院(天津医科大学肿瘤医院) 一种哺乳动物细胞基因组整合的高丰度DNA编码文库构建方法及其应用

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