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申请/专利权人：中化健康产业发展有限公司;合肥工业大学

摘要：本发明公开了一种发酵液中硫酸软骨素类多糖含量的定量检测方法，属于分析检测领域。该方法是以硫酸软骨素C为标准样品，将酶解法与蒽酮‑硫酸法相结合，酶解前通过超滤去除发酵液中小分子杂质，再用硫酸软骨素裂解酶将硫酸软骨素类多糖酶解为寡糖，再通过超滤去除大分子杂质，得到的过滤液使用蒽酮‑硫酸法测定糖含量。该方法偶联了酶专一性分解硫酸软骨素类多糖的化学分析方法，只需通过两个步骤，即可将复杂成份中造成定量干扰的小分子、大分子杂质去除，结合蒽酮‑硫酸法可以简便、准确的测定复杂培养液中的硫酸软骨素类多糖含量。

主权项：1.一种大肠杆菌发酵液中硫酸软骨素类多糖含量的定量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：绘制标准曲线：使用标准品绘制标准曲线；S2：样品中硫酸软骨素类多糖含量测定：S21：超滤去除样品中小分子杂质；S22：使用硫酸软骨素裂解酶将硫酸软骨素类多糖酶解为寡糖；S23：超滤去除大分子杂质；S24：使用蒽酮-硫酸法测定糖含量，即超滤去除大分子后与蒽酮反应试剂反应，测定OD620，根据S1中的标准曲线计算硫酸软骨素类多糖的含量；所述硫酸软骨素类多糖为软骨素；所述S21中超滤去除样品中小分子杂质包括：取样品加入10-30KDa超滤管，12000-14000g离心30-60min，去除发酵液中小分子杂质；所述S23中超滤去除大分子杂质包括：将S22中收集上清加入10KDa超滤管，12000-14000g离心30-60min，得到过滤液；所述S21中样品超滤前用0.22-0.45μm滤器过滤；所述标准品为硫酸软骨素C；所述硫酸软骨素裂解酶为硫酸软骨素裂解酶AC，所述硫酸软骨素裂解酶AC为硫酸软骨素裂解酶AsChnAC；所述S22中硫酸软骨素类多糖酶解包括：向超滤管加pH7Tris-HCl，倒置超滤管，1000g离心，加pH7Tris-HCl定容至一定体积；加同等体积的AsChnAC于定容后的溶液中，恒温水浴反应至酶解完全，煮沸，冷却后12000-14000g离心，收集上清。

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