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申请/专利权人：武汉戴安生物技术有限公司
摘要：本发明提出了一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，包括如下步骤：S1，以人前列腺癌细胞LNCaP和重组PSMA蛋白为抗原，交叉免疫羊驼，刺激羊驼免疫系统产生识别抗PMSA的抗体，免疫结束后ELISA测定免疫血清效价；S2，根据免疫血清效价构建噬菌体文库，洗脱噬菌体富集出高亲和力的噬菌体抗体；S3，对噬菌体抗体进行抗原ELISA筛选、LNCap细胞流式验证获得高亲和力的抗体序列。本发明首先以LNCaP细胞免疫，刺激羊驼免疫系统产生识别天然结构的抗PMSA抗体。然后使用重组PSMA蛋白进行加强免疫，通过使用细胞和重组蛋白交叉刺激，不断提高羊驼体内产生识别天然结构抗体的比例，同时提高抗体的亲和力，通过后续的多次筛选能够得到高亲和力的抗体。
主权项：1.一种制备高亲和力PSMA纳米抗体的方法，其特征在于：包括如下步骤：S1，以人前列腺癌细胞LNCaP和重组PSMA蛋白为抗原，交叉免疫羊驼，刺激羊驼免疫系统产生识别抗PMSA的抗体，免疫结束后ELISA测定免疫血清效价；所述重组PSMA蛋白制备方法为：取PMSA蛋白胞外区44-750aa作为免疫源，插入哺乳动物细胞表达载体pTT5，转染293f细胞表达免疫原得到重组PSMA蛋白；所述重组PSMA蛋白的核苷酸序列如SEQIDNO：3所示；交叉免疫方法为：第一次免疫用LNCaP细胞加强化完全佐剂，隔1周后再用重组PSMA蛋白加弗氏不完全佐剂加强一次，之后每隔1周用LNCaP细胞加强化完全佐剂和重组PSMA蛋白加弗氏不完全佐剂交替加强一次；共免疫6次；所述强化完全佐剂是在sigma完全佐剂的基础上添加硬脂酸铝、甘油葡萄糖苷和异鼠李素；所述硬脂酸铝的质量浓度为3％，甘油葡萄糖苷的浓度为1mgmL，异鼠李素的终浓度为1mgmL；S2，根据免疫血清效价构建噬菌体文库，洗脱噬菌体富集出高亲和力的噬菌体抗体；S3，对噬菌体抗体进行抗原ELISA筛选、LNCap细胞流式验证获得高亲和力的抗体序列。
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