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申请/专利权人：北京亿森宝生物科技有限公司
摘要：本发明涉及支原体检测技术领域，具体公开了鉴别鸡毒支原体野毒株和疫苗核酸的RAA‑CRISPR引物组合、反应体系、方法与应用。RAA引物组合包括：序列分别如SEQIDNo.1和2所示的检测鸡毒支原体野毒的上、下游引物和序列分别如SEQIDNo.4和5所示的检测鸡毒支原体疫苗的上、下游引物。crRNA引物组合包括序列分别如SEQIDNo.3和4所示的Cas12a‑crRNA和Cas13a‑crRNA。应用本发明的RAA引物组合、crRNA引物组合组成的反应体系可同时实现鸡毒支原体野毒和疫苗的检测，特异性好，敏感性高，可通过同一个反应体系实现待测样品中鸡毒支原体野毒株和疫苗株的检测。
主权项：1.检测鸡毒支原体野毒株和疫苗株的RAA-CRISPRCAS12aCAS13a反应体系，其特征在于，包括RAA引物组合、crRNA引物组合、报告基因ssDNA、ssRNA、LbCas12a蛋白和LbCas13a蛋白；所述RAA引物组合为序列SEQIDNo.1所示的检测鸡毒支原体野毒株的上游引物、序列SEQIDNo.2所示的检测鸡毒支原体野毒株的下游引物、序列SEQIDNo.4所示的检测鸡毒支原体疫苗株的上游引物和序列SEQIDNo.5所示的检测鸡毒支原体疫苗株的下游引物的组合；序列中，W代表A或T，Y代表C或T，M代表A或C；所述crRNA引物组合为Cas12a-crRNA和Cas13a-crRNA的组合，所述Cas12a-crRNA的序列如SEQIDNo.3所示，所述Cas13a-crRNA的序列如SEQIDNo.6所示；所述ssDNA的序列如SEQIDNo.19所示，所述ssRNA的序列为UUUUUUUU；所述ssDNA和ssRNA还分别标记有可产生不同荧光色的荧光基团；所述野毒株为野毒株S6或野毒株R，所述疫苗株为TS-11。
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