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申请/专利权人：天津大学

摘要：本发明公开了一种原代视网膜细胞分离、培养方法和多模态信号检测方法，本发明对小鼠的视网膜细胞进行分离，得到小鼠的原代视网膜细胞，并将原代视网膜细胞置于维持培养基中培养，进行长期维持培养，原代视网膜细胞可以存活至少20天。本发明通过微电极阵列MCS来记录原代视网膜细胞培养过程中的电信号，细胞培养至第5天时出现电信号；本发明通过钙成像技术来记录原代视网膜细胞培养过程中的钙信号，细胞培养至第5天时出现钙信号。

主权项：1.一种原代视网膜细胞的分离、培养方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，配制SATO补充剂；步骤2，配制DMEM-Sato基础培养基；步骤3，将人脑源性神经营养因子重悬于D-PBS中，得到BDNF主储备液，其中，所述人脑源性神经营养因子的质量份数和所述D-PBS的体积份数的比为0.5-2：0.5-2，所述质量份数的单位为mg，体积份数的单位为mL；步骤4，在冰上冷冻BSA溶液，将所述BDNF主储备液加入BSA溶液中混合均匀，得到人脑源性神经营养因子工作液，其中，按体积份数计，所述BDNF主储备液和所述BSA溶液的体积份数的比为0.03-0.5：3-5；步骤5，用BSA溶液将睫状神经营养因子稀释至5-20μgmL，得到CNTF工作液；步骤6，在Forskolin腺苷酸环化酶激活剂中加入第一份无菌DMSO，上下吸液，直至粉末完全重悬，再加入第二份无菌DMSO，至浓度为2-8mgmL，得到Forskolin工作液，其中，所述Forskolin腺苷酸环化酶激活剂的质量份数、所述第一份无菌DMSO的体积份数和第二份无菌DMSO的体积份数比为10-60：0.1-3：6-15，所述质量份数的单位为mg，体积份数的单位为mL；步骤7，将所述BDNF主储备液、CNTF工作液和Forskolin工作液混合均匀，溶于DMEM-Sato基础培养基中培养，得到维持培养基，其中，按体积份数计，所述BDNF主储备液、CNTF工作液、Forskolin工作液和的DMEM-Sato基础培养基的比为5-50：5-50：5-50：15000-25000；步骤8，对小鼠视网膜进行分离，获得视网膜组织；步骤9，将消化液孵育后，一小时内，将视网膜组织转移到消化液中消化，消化完全后吸取上清液，加入终止消化液，静置等待直至终止消化完全后吸取上清液，加入维持培养基，解离吹打，离心，重悬于维持培养基中，过滤，得到含有原代视网膜细胞的维持培养基，其中，按体积份数计，所述消化液、终止消化液和维持培养基的比为0.5-5：0.5-5：0.5-5；步骤10，将含有原代视网膜细胞的维持培养基接种于预处理后的孔板中培养，每日将孔板置于显微镜下观察培养基，若显微镜视野内出现0.01-1％的漂浮细胞进行半量换液，若视野内1-10％的漂浮细胞进行全量换液，对原代视网膜细胞进行长期培养。

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