买专利卖专利找龙图腾，真高效！ 查专利查商标用IPTOP,全免费！专利年费监控用IP管家,真方便！

申请/专利权人：合肥巅峰生物科技有限公司;中国民用航空飞行学院

摘要：本发明公开了一种ATP法快速检测航油微生物污染的试剂及检测方法，其具体包括以下步骤：检测试剂的包装撕开，取出BufferB和BufferC置于反应管架上。将移液枪调至100μL刻度，在装吸头的袋子中装上吸头。吸取100μL待测样品，贴壁加入到BufferB中，盖上管盖，用手指捏住BufferB管的两头上下振荡5s，上下振荡不少于10次后重新放回反应管架上。将移液枪调至50μL刻度，在装吸头的袋子中装上吸头。吸取50μL上步骤中的BufferB管内的液体，加入到BufferC管内的液体中吸头尖插入到液面下加入，立即盖上管盖，用手指捏住BufferC管的两头上下振荡5s，上下振荡不少于10次后，立即放入检测仪器内进行检测。检测结束后，用镊子将检测仪器内BufferC管夹出，记录检测数据，检测仪器关机。

主权项：1.一种应用于ATP法快速检测航油微生物污染的检测方法的试剂，其特征在于：其主要成分组成为：微生物萃取剂1ml，荧光素酶冻干粉稀释液0.5ml、ATP提取液0.1ml和荧光素酶冻干粉；试剂中荧光素酶冻干粉稀释液包括以下成分：去离子水≥90%、丙三醇2%-5%、聚乙二醇1%-3%、甘氨酸0.5%-1%、胆固醇0.5%-2%、卵磷脂1%-3%、叠氮化钠0.02%，PH：7.8；试剂中ATP提取液包括以下成分：去离子水、CHEX0.04%-0.2%、Tritonx-1000.25%-1.0%、CTAB0.02-0.1%、Tween-200.05%-0.1%、HEPES200mM、PH：7.8；试剂中荧光素酶冻干粉的制备方法如下：A、制备虫荧光素酶蛋白；包括以下步骤：一、利用重组的萤火虫荧光素酶大肠杆菌工程菌，在50L的发酵罐中进行扩大培养；二、加入IPTG，诱导大肠杆菌表达萤火虫荧光素酶；三、离心收集菌泥，用PBS重悬菌泥，超声破碎；四、离心收集上清；五、用镍柱纯化萤火虫荧光素酶蛋白；B、制备火虫荧光素酶；将A中萤火虫荧光素酶粗酶液50ml加入到1L反应BufferT中；其中BufferT具体为10mMTris-acetate,50mMNaCl,0.1mMCaCl2,0.1mMDTT,PH：6.5,再加入50mgApyrase，25℃反应1h；上镍柱纯化得到纯萤火虫荧光素酶；试剂中荧光素酶冻干粉组成成分：蛋白纯度为99%的1mgml虫荧光素酶液体，葡萄糖≤5%，海藻糖≤10%，甘露醇≤10%，BSA≤5%，氯化钠≤5%，磷酸氢二钠≤1%，0.5mM虫荧光素。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 合肥巅峰生物科技有限公司 中国民用航空飞行学院 一种ATP法快速检测航油微生物污染的试剂和检测方法