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一种利用梨果实愈伤组织进行基因功能验证的方法 

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申请/专利权人:华中农业大学

摘要:本发明公开了一种利用梨果实愈伤组织进行基因功能验证的方法,具体为:切取三季梨果实并接种于诱导培养基中培养以获取愈伤组织,将愈伤组织置于增殖培养基中继代培养,用含有Kan抗性基因和目的基因的农杆菌侵染愈伤组织,再将愈伤组织转入添加有Kan和Tim的增殖培养基中暗培养,对鉴定阳性的愈伤组织进行传代,得到转基因纯合愈伤后进行基因功能验证。本发明首次利用“三季”果实成功建立了能够实现基因功能验证的愈伤组织转化系统,丰富了梨基因研究的工具和平台。

主权项:1.一种利用梨果实愈伤组织进行基因功能验证的方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)切取三季梨果实并接种于愈伤组织诱导培养基中,培养获取愈伤组织;(2)将愈伤组织置于愈伤组织增殖培养基中继代培养;(3)愈伤组织经农杆菌侵染后共培养;(4)将愈伤组织转入添加有Kan和Tim的愈伤组织增殖培养基中暗培养30-60d;(5)将步骤(4)所得阳性愈伤转移至添加有Tim的愈伤组织增殖培养基中传代培养,得到用于目的基因功能验证的纯合愈伤组织;其中,愈伤组织诱导培养基为:MS+0.4mgL6-BA+1.5mgL2,4-D+30gLSucrose+7gLAgar;愈伤组织增殖培养基为:MS+0.1mgL6-BA+2mgL2,4-D+30gLSucrose+7gLAgar;所述农杆菌含有Kan抗性基因和目的基因。

全文数据:

权利要求:

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