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申请/专利权人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所;中国热带农业科学院海口实验站

摘要：本发明涉及秋石斛胚性愈伤组织诱导及再生技术领域，具体地说，涉及一种秋石斛胚性愈伤组织诱导及再生的组培方法。其具体包括以下步骤：步骤S1、选取秋石斛的成熟果荚进行消毒处理；切开果荚，用无菌手术刀将秋石斛种子取出；步骤S2、将所述种子接种至种子培养基，经过培养后，获得无菌苗；步骤S3、将所述无菌苗的茎段接种到诱导培养基中，诱导培养获得所述胚性愈伤组织；步骤S4、将所述胚性愈伤组织接种到所述增殖培养基中，进行增殖培养30天，获得增殖的胚性愈伤组织；步骤S5、分化培养并获得不定芽；步骤S6、不定芽接种到所述生根培养基中，生根培养获得秋石斛幼苗。本发明中的组培方法能够较为高效的得到再生植株。

主权项：1.一种秋石斛胚性愈伤组织诱导及再生的组培方法，其特征在于：其具体包括以下步骤，步骤S1、选取秋石斛的成熟果荚进行消毒处理，获得消毒后的果荚；然后将消毒后的果荚置于无菌平皿中，切开果荚，用无菌手术刀将秋石斛种子取出；步骤S2、将所述种子接种至种子培养基，经过培养后，获得无菌苗；步骤S2中所述种子培养基的组成为：12MS+3gL花宝1号+2gL蛋白胨+0.5gL活性炭+30gL蔗糖+8gL卡拉胶；所述无菌苗的培养方法为：步骤S2中的所述培养具体包括以下步骤：以种子培养基在25-28℃、光照强度100μmolm2s、光照时间16小时天条件下，对所述秋石斛种子培养30天获得原球茎，2-3个月后获得2-3叶期无菌苗；步骤S3、将所述无菌苗的茎段接种到诱导培养基中，在25-28℃黑暗条件下进行诱导培养30-40天，获得胚性愈伤组织；步骤S3中所述诱导培养基的组成为：MSD+0.1-2mgL2,4-D+0.5mgLKT；MSD的组成为：MS+30gL葡萄糖+1gL花宝1号+8gL琼脂；步骤S4、将所述胚性愈伤组织接种到增殖培养基中，在25-28℃黑暗条件下进行增殖培养30天，得到增殖的胚性愈伤组织；步骤S4中所述增殖培养基的组成为：MSD+0.1-0.5mgL2,4-D+0.1-0.5mgLKT；MSD的组成为：MS+30gL葡萄糖+1gL花宝1号+8gL琼脂；步骤S5、在所述增殖的胚性愈伤组织中选取生长状态一致的胚性愈伤组织接种到分化培养基中，在25-28℃光照条件下进行分化培养30天，获得不定芽；步骤S5中所述分化培养基的组成为：12MS+30mgLGlu+1gL花宝+8gL琼脂+0.5mgLIBA+0.15mgLKT或12MS+30mgLGlu+1gL花宝+8gL琼脂+3mgL6-BA+1mgLNAA；步骤S6、将不定芽接种到生根培养基中，在25-28℃光照条件下进行生根培养30天，获得秋石斛幼苗；步骤S6中的所述生根培养基的组成为：12MS+30gL蔗糖+0.5mgLNAA+8gL琼脂或12MS+30gL蔗糖+0.5mgLNAA+0.5mgLKT+8gL琼脂。

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